[发明专利]琼脂平板筛选降解林可霉素好氧细菌的方法

摘要

本发明涉及林可霉素降解菌的筛选，具体的说是一种在琼脂平板中筛选降解林可霉素的好氧细菌，本发明基于降解菌后期将应用于降解林可霉素生产废渣中抗生素残留的考虑，研究在琼脂平板中以固体培养方式筛选菌株。本发明具体方案包括：琼脂平板中林可霉素测定方法建立、样品采集和菌种分离、琼脂平板中筛选菌株。在利用酸溶加热方式解决了琼脂平板中林可霉素定量测定的基础上，提供了一种以固体培养方式，在琼脂平板中筛选林可霉素降解菌的技术，具有操作方便、快速、准确等优点。通过本方法筛选出降解林可霉素的好氧细菌，可应用于降解林可霉素生产废渣的抗生素残留，为实现废渣的资源化利用奠定基础。

主权项

一种琼脂平板筛选降解林可霉素好氧细菌的方法，其特征在于：按下述步骤制备：(1)基础培养基琼脂平板的制备：按下列浓度配制培养基，K2HPO4 1.0g/L，KH2PO4 0.2g/L，MgSO4·7H2O 0.2g/L，CaCl2·2H2O 0.04g/L，FeCl3·6H2O 0.005g/L，NH4NO3 0.25g/L，琼脂15～20g/L，于121℃灭菌15min，以10ml/个培养皿分装培养基，待培养基冷却凝固后在其表面均匀添加一定量的林可霉素水溶液，静置至表面干燥即可；(2)琼脂中林可霉素测定方法：采用酸溶加热的方式溶解琼脂平板，通过紫外分光光度法测定林可霉素含量，对琼脂平板中林可霉素进行定量分析，为林可霉素降解菌的筛选奠定基础；(3)样品采集：从林可霉素生产废渣堆放处的土壤取样，利用无菌水配制成土壤稀释液用于菌种的分离；(4)菌种分离：取0.2mL土壤稀释液涂布于含0.015g林可霉素的基础培养基固体琼脂平板，30℃下培养5天，经稀释涂布分离单菌落，获得能够以林可霉素为唯一碳源和能源生长的菌株并保存试管中；(5)菌种筛选：无菌水将分离得到的菌种配成菌悬液，OD值0.8，取0.2mL涂布含0.02g林可霉素的基础培养基琼脂平板中，以不接种的相同平板为空白对照，在30℃培养7天后，在优化得到的最佳酸溶解工艺条件下测定样品，并根据线性回归方程测定出琼脂平板中林可霉素的含量，以林可霉素降解率为指标，筛选林可霉素降解菌。