[发明专利]一种耐甲硫氨酸的除虫链霉菌菌种筛选方法

摘要

本发明公开了一种耐甲硫氨酸的除虫链霉菌菌种筛选方法，属于微生物菌种筛选领域；通过对除虫链霉菌孢子悬液紫外线诱变后，经过含甲硫氨酸的液体培养基对耐受菌株的进行富集，再进行甲硫氨酸固体平板耐受菌株筛选的结合，然后通过初筛、复筛和遗传稳定性考察，筛选出比出发菌株摇瓶能力提高的菌株，为除虫链霉菌菌种筛选提供可行方法。本发明筛选出的除虫链霉菌菌株摇瓶生产能力提高幅度大，遗传稳定性好。

主权项

一种耐甲硫氨酸的除虫链霉菌菌种筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)、取生长好的除虫链霉菌斜面一支，作为出发菌种，向内加入适量纯化水，将除虫链霉菌斜面上的孢子刮下得孢子液，将孢子液中的孢子链打碎、过滤得除虫链霉菌单孢子悬液一；(2)、将除虫链霉菌单孢子悬液一置于紫外线灯下经照射进行诱变处理，然后接入含2‑3％甲硫氨酸的液体培养基中，在温度27.5‑28.5℃、湿度30‑50％的条件下培养4‑6天，富集耐受2‑3％甲硫氨酸的菌株；(3)、将耐受2‑3％甲硫氨酸的菌株接入斜面培养基，在温度27.5‑28.5℃、湿度30‑50％的条件下培养7‑9天，然后从斜面培养基中取一支成熟斜面，向内加入适量纯化水，轻轻将成熟斜面上的孢子刮下，然后将孢子链打碎后过滤得耐受2‑3％甲硫氨酸的除虫链霉菌单孢子悬液二；吸取除虫链霉菌单孢子悬液二稀释成10‑4，10‑5，10‑6梯度浓度，然后分别吸取稀释后的10‑4，10‑5，10‑6梯度浓度的除虫链霉菌单孢子悬液二0.18‑0.22ml分别涂在含2‑3％甲硫氨酸的平板上，在含2‑3％甲硫氨酸的平板培养基中，在温度27.5‑28.5℃、湿度30‑50％的条件下培养5‑8天；(4)、从涂过稀释过的除虫链霉菌单孢子悬液二的上述平板上中选取菌落密度适宜、菌落形态好的平板，从此平板上挑取单菌落接种至斜面培养基，在温度27.5‑28.5℃、湿度30‑50％的条件下培养7‑9天，然后从培养好的斜面培养基上挖下0.8‑0.12cm2的菌苔接入种子培养基，在温度27.5‑28.5℃、湿度30‑50％的条件下摇瓶培养24‑28h后，按发酵体积的10％接种到发酵培养基中，在温度27.5‑28.5℃、湿度30‑50％的条件下摇瓶培养240‑280h，然后测定效价，挑选出效价比出发菌种效价高的菌株；(5)、将步骤4挑选的效价较高的菌株接种至斜面培养基在温度27.5‑28.5℃、湿度30‑50％的条件下培养7‑9天，再从培养好的斜面培养基上挖下0.8‑0.12cm2的菌苔接入种子培养基，在温度27.5‑28.5℃、湿度30‑50％的条件下摇瓶培养24‑28h后，按发酵体积的10％接种到发酵培养基中，在温度27.5‑28.5℃、湿度30‑50％的条件下摇瓶培养240‑280h，然后测定效价，挑选出效价比出发菌种效价高的菌株；(6)、将步骤5挑选的效价较高的菌株进行遗传稳定性考察：即通过斜面培养基进行传代培养，在温度27.5‑28.5℃、湿度30‑50％的条件下培养7‑9天，从得到的各子代斜面上挖下0.8‑0.12cm2的菌苔接入种子培养基，在温度27.5‑28.5℃、湿度30‑50％的条件下摇瓶培养24‑28h后，按发酵体积的10％接种到发酵培养基中，在温度27.5‑28.5℃、湿度30‑50％的条件下摇瓶培养240‑280h，然后测定效价，挑选出遗传稳定性较好的菌株即菌种经斜面传代，各子代斜面的效价之间差异较小。