[发明专利]一种提取棉花线粒体及其RNA的方法

摘要

本发明公开了一种提取棉花线粒体及其RNA的方法。本发明的方法包括如下步骤：(1)将棉花黄化苗的根进行液氮研磨，加入4℃溶液甲，振荡混匀，冰上静置2-30min；溶液甲由溶液A和蛋白酶K组成，蛋白酶K的浓度为0.01-1mg/mL；(2)4℃、500-2000×g离心5-40min，取上清液；4℃、1000-4000×g离心5-40min，取上清液；4℃、8000-30000×g离心15-120min，取沉淀物；(3)用溶液A洗涤重悬沉淀物，8000-30000×g离心15-120min，收集沉淀物，即为线粒体。本发明可解决现在棉花线粒体研究技术难题，有效地从棉花线粒体中得到高质量的线粒体RNA(mtRNA)。提取的mtRNA适用于相关分子生物学实验。

主权项

提取棉花线粒体的方法，包括如下步骤：(1)将棉花黄化苗的根进行液氮研磨，然后加入4℃预冷的溶液甲，振荡混匀，冰上静置2‑30min；溶液甲由溶液A和蛋白酶K组成，蛋白酶K的浓度为0.01‑1mg/mL；(2)4℃、500‑2000×g离心5‑40min，取上清液；然后4℃、1000‑4000×g离心5‑40min，取上清液；然后4℃、8000‑30000×g离心15‑120min，取沉淀物；(3)用溶液A洗涤重悬沉淀物，8000‑30000×g离心15‑120min，收集沉淀物，即为线粒体；所述步骤(1)和步骤(3)中的溶液A由NaCl、Tris‑HCl、EDTA‑Na2、DEPC水、PVP‑40、BSA和β‑巯基乙醇组成；溶液A中，NaCl的浓度为0.5‑2.0mol/L，Tris‑HCl的浓度为0.01‑1.00mol/L，EDTA‑Na2的浓度为0.5‑4mmol/L，PVP‑40的浓度为0.5‑5％(体积百分含量)，BSA的浓度为0.05‑0.5％(体积百分含量)，β‑巯基乙醇的浓度为1‑10mmol/L。