[发明专利]一种能用同源重组来克隆的枯草芽孢杆菌整合载体的构建及其应用

摘要

本发明公开了一种能用同源重组来克隆的枯草芽孢杆菌整合载体的构建及其应用。一种能用同源重组来克隆外源DNA片断的枯草芽孢杆菌整合载体的构建及其应用，属于生物技术领域。这种载体pMLK-BN能够将克隆在常用克隆载体puc18、puc19或puc57上的外源基因或启动子通过同源重组的方法转移到自身，从而能够在枯草芽孢杆菌中整合表达外源蛋白，或者测试启动子的启动效果。同源重组的克隆方法与常用的连接克隆方法比较简单高效，pMLK-BN能够有效地作为克隆外源基因或启动子到枯草芽孢杆菌中进行整合表达的一种载体的选择。

主权项

一种能用同源重组来克隆外源DNA的枯草芽孢杆菌整合载体pMLK83‑BN，其序列如下：1    GTCGACGCCG ATTCATTAAT GCAGCTGGCA CGACAGGTTT CCCGACGGAT51   CCTTTTCTCC TTACGCATCT GTGCGGTATT TCACACCGCA TAGCGGTGGC101  GGCCGCTCTA GTTAAGGAGG TGATCTAGAA TTCATGGTCC GTCCTGTAGA151  AACCCCAACC CGTGAAATCA AAAAACTCGA CGGCCTGTGG GCATTCAGTC201  TGGATCGCGA AAACTGTGGA ATTGATCAGC GTTGGTGGGA AAGCGCGTTA251  CAAGAAAGCC GGGCAATTGC TGTGCCAGGC AGTTTTAACG ATCAGTTCGC301  CGATGCAGAT ATTCGTAATT ATGCGGGCAA CGTCTGGTAT CAGCGCGAAG351  TCTTTATACC GAAAGGTTGG GCAGGCCAGC GTATCGTGCT GCGTTTCGAT401  GCGGTCACTC ATTACGGCAA AGTGTGGGTC AATAATCAGG AAGTGATGGA451  GCATCAGGGC GGCTATACGC CATTTGAAGC CGATGTCACG CCGTATGTTA501  TTGCCGGGAA AAGTGTACGT ATCACCGTTT GTGTGAACAA CGAACTGAAC551  TGGCAGACTA TCCCGCCGGG AATGGTGATT ACCGACGAAA ACGGCAAGAA601  AAAGCAGTCT TACTTCCATG ATTTCTTTAA CTATGCCGGA ATCCATCGCA651  GCGTAATGCT CTACACCACG CCGAACACCT GGGTGGACGA TATCACCGTG701  GTGACGCATG TCGCGCAAGA CTGTAACCAC GCGTCTGTTG ACTGGCAGGT751  GGTGGCCAAT GGTGATGTCA GCGTTGAACT GCGTGATGCG GATCAACAGG801  TGGTTGCAAC TGGACAAGGC ACTAGCGGGA CTTTGCAAGT GGTGAATCCG851  CACCTCTGGC AACCGGGTGA AGGTTATCTC TATGAACTGT GCGTCACAGC901  CAAAAGCCAG ACAGAGTGTG ATATCTACCC GCTTCGCGTC GGCATCCGGT951  CAGTGGCAGT GAAGGGCGAA CAGTTCCTGA TTAACCACAA ACCGTTCTAC1001 TTTACTGGCT TTGGTCGTCA TGAAGATGCG GACTTGCGTG GCAAAGGATT1051 CGATAACGTG CTGATGGTGC ACGACCACGC ATTAATGGAC TGGATTGGGG1101 CCAACTCCTA CCGTACCTCG CATTACCCTT ACGCTGAAGA GATGCTCGAC1151 TGGGCAGATG AACATGGCAT CGTGGTGATT GATGAAACTG CTGCTGTCGG1201 CTTTAACCTC TCTTTAGGCA TTGGTTTCGA AGCGGGCAAC AAGCCGAAAG1251 AACTGTACAG CGAAGAGGCA GTCAACGGGG AAACTCAGCA AGCGCACTTA1301 CAGGCGATTA AAGAGCTGAT AGCGCGTGAC AAAAACCACC CAAGCGTGGT1351 GATGTGGAGT ATTGCCAACG AACCGGATAC CCGTCCGCAA GGTGCACGGG1401 AATATTTCGC GCCACTGGCG GAAGCAACGC GTAAACTCGA CCCGACGCGT1451 CCGATCACCT GCGTCAATGT AATGTTCTGC GACGCTCACA CCGATACCAT1501 CAGCGATCTC TTTGATGTGC TGTGCCTGAA CCGTTATTAC GGATGGTATG1551 TCCAAAGCGG CGATTTGGAA ACGGCAGAGA AGGTACTGGA AAAAGAACTT1601 CTGGCCTGGC AGGAGAAACT GCATCAGCCG ATTATCATCA CCGAATACGG1651 CGTGTATACG TTAGCCGGGC TGCACTCAAT GTACACCGAC ATGTGGAGTG1701 AAGAGTATCA GTGTGCATGG CTGGATATGT ATCACCGCGT CTTTGATCGC1751 GTCAGCGCCG TCGTCGGTGA ACAGGTATGG AATTTCGCCG ATTTTGCGAC1801 CTCGCAAGGC ATATTGCGCG TTGGCGGTAA CAAGAAAGGG ATCTTCACTC1851 GCGACCGCAA ACCGAAGTCG GCGGCTTTTC TGCTGCAAAA ACGCTGGACT1901 GGCATGAACT TCGGTGAAAA ACCGCAGCAG GGAGGCAAAC AATGAATCAA1951 CAACTCTCCT GGCGCACCAT CGTCGGCTAC AGCCTCGGGA ATTCGATGGT2001 CGAGATCAGG GAATGAGTTT ATAAAATAAA AAAAGCACCT GAAAAGGTGT2051 CTTTTTTTGA TGGTTTTGAA CTTGTTCTTT CTTATCTTGA TACATATAGA2101 AATAACGTCA TTTTTATTTT AGTTGCTGAA AGGTGCGTTG AAGTGTTGGT2151 ATGTATGTGT TTTAAAGTAT TGAAAACCCT TAAAATTGGT TGCACAGAAA2201 AACCCCATCT GTTAAAGTTA TAAGTGACTA AACAAATAAC TAAATAGATG2251 GGGGTTTCTT TTAATATTAT GTGTCCTAAT AGTAGCATTT ATTCAGATGA2301 AAAATCAAGG GTTTTAGTGG ACAAGACAAA AAGTGGAAAA GTGAGACCAT2351 GAGCTTATGC TTAGGAAGAC GAGTTATTAA TAGCTGAATA AGAACGGTGC2401 TCTCCAAATA TTCTTATTTA GAAAAGCAAA TCTAAAATTA TCTGAAAAGG2451 GAATGAGAAT AGTGAATGGA CCAATAATAA TGACTAGAGA AGAAAGAATG2501 AAGATTGTTC ATGAAATTAA GGAACGAATA TTGGATAAAT ATGGGGATGA2551 TGTTAAGGCT ATTGGTGTTT ATGGCTCTCT TGGTCGTCAG ACTGATGGGC2601 CCTATTCGGA TATTGAGATG ATGTGTGTCA TGTCAACAGA GGAAGCAGAG2651 TTCAGCCATG AATGGACAAC CGGTGAGTGG AAGGTGGAAG TGAATTTTGA2701 TAGCGAAGAG ATTCTACTAG ATTATGCATC TCAGGTGGAA TCAGATTGGC2751 CGCTTACACA TGGTCAATTT TTCTCTATTT TGCCGATTTA TGATTCAGGT2801 GGATACTTAG AGAAAGTGTA TCAAACTGCT AAATCGGTAG AAGCCCAAAC2851 GTTCCACGAT GCGATTTGTG CCCTTATCGT AGAAGAGCTG TTTGAATATG2901 CAGGCAAATG GCGTAATATT CGTGTGCAAG GACCGACAAC ATTTCTACCA2951 TCCTTGACTG TACAGGTAGC AATGGCAGGT GCCATGTTGA TTGGTCTGCA3001 TCATCGCATC TGTTATACGA CGAGCGCTTC GGTCTTAACT GAAGCAGTTA3051 AGCAATCAGA TCTTCCTTCA GGTTATGACC ATCTGTGCCA GTTCGTAATG3101 TCTGGTCAAC TTTCCGACTC TGAGAAACTT CTGGAATCGC TAGAGAATTT3151 CTGGAATGGG ATTCAGGAGT GGACAGAACG ACACGGATAT ATAGTGGATG3201 TGTCAAAACG CATACCATTT TGAACGATGA CCTCTAATAA TTGTTAATCA3251 TGTTGGTTAC GTATTTATTA ACTTCTCCTA GTATTAGTAA TTATCAGAAT3301 TGATCTGCGG CCGCGAATTA TCAAGCTCTG AGCGCCGGTC GCTACCATTA3351 CCAGTTGGTC TGGTGTCAAA AATAATAATA ACCGGGCAGG CCATGTCTGC3401 CCGTATTTCG CGTAAGGAAA TCCATTATGT ACTATTTAAT TCTGCGTGAC3451 ATCCCATCGA TCAGACCAGT TTTTAATTTG TGTGTTTCCA TGTGTCCAGT3501 TTGGAATACT CTTAACCTCA TTGGAAATCG CGGCATAATC ACTGGTGGTA3551 TGATTGATGA CCGCGTCAAC AATGACCTTT ATGCCATATT CTTCAGCGGC3601 TGCACACATT TCTTTAAATT CTTGTTCAGT ACCTAAGTAA CGGTTGCCAA3651 TTTGATACGA TGTCGGCTGA TACAGCCAGT ACCAGTTCGA CATGCTTTTA3701 TCTCCTTGAT TCCCTTCCTT TACTTGGTTA ATCGGAGATG TCTGAATGGC3751 TGTATATCCT GCATCATGAA TATCCTTCAT ATTGTGTTTT AACGTATTGA3801 ACGACCAATT CCATGCATGA AGAATGGTTC CGCTTTTGAT CGACGGTGCT3851 GTAAGCTCAT TCGATTTGTT CGCCGTTTCA GCACTCGCAG CCGCCGGTCC3901 TGCCAGAACC AAATGAAACA GCAATAAAAA TCCAGCGAAT AACGGCAGTA3951 AAGAGGTTTT GAATCGTTTT GCAAACATTC TTGACACTCC TTATTTGATT4001 TTTTGAAGAC TTACTTCGGA GTCAAAAATC CCTCTTACTT CATTCTTCCG4051 CTTCCTCCTT TCAAACCGAT GTGAAGACTG GAGAATTTTG TTAATTCTTG4101 AAGACGAAAG GGCCTCGTGA TACGCCTATT TTTATAGGTT AATGTCATGA4151 TAATAATGGT TTCTTAGACG TCAGGTGGCA CTTTTCGGGG AAATGTGCGC4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