[发明专利]一种基于热激蛋白基因辅助选育耐高温海带品种的方法

摘要

本发明公开了一种基于热激蛋白基因辅助选育耐高温海带品种的方法，其特征在于从热激蛋白基因保守区域设计引物及探针，在育种群体中进行筛选，检测扩增产物及其拷贝数，选择具有耐高温性状的个体。本发明通过建立热激蛋白基因拷贝数与海带耐高温性状的关联，可以通过实时荧光定量PCR方便快捷地检测海带子代个体的耐高温情况，从而筛选具有优良性状的个体进一步选育，这种依靠目的基因辅助育种的方法，大大提高了育种的目标性和效率。

主权项

一种基于热激蛋白基因辅助选育耐高温海带品种的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）在线对海带的表达序列标签进行功能注释，搜索具有热激蛋白功能的基因片段；（2）提取海带总RNA，利用热激蛋白基因片段设计用于扩增基因全长的引物，并通过cDNA末端快速扩增技术克隆得到cDNA全长；（3）分析得到的全长序列，在其保守区域设计用于荧光定量PCR的引物及探针；（4）提取海带基因组DNA，倍比稀释，制作荧光定量PCR标准品，使用荧光定量PCR引物对标准品进行扩增，建立标准曲线；（5）以海带基因组中单拷贝的海藻糖合成酶基因，即TPS基因为内标，设计其引物和探针，并且采用与步骤（4）相同的方法建立内标的标准曲线；（6）进行荧光定量PCR，根据待测热激蛋白基因与内标TPS基因的标准曲线计算两者起始模板数，内标基因拷贝数为已知，根据内标基因拷贝数进一步计算热激蛋白基因拷贝数；（7）利用上述方法对已知耐高温海带品种与对照品种进行荧光定量检测，设置三组重复，分别计算耐高温海带与对照海带热激蛋白基因的拷贝数，从而建立热激蛋白基因拷贝数与耐高温性状的关联；（8）使用同一对荧光定量PCR引物在育种群体中进行筛选，检测扩增产物的拷贝数，选择具有耐高温性状的个体。