[发明专利]兽用狂犬病病毒与疫苗及二者的生产方法

摘要

本发明公开了一种大规模生产动物用狂犬病病毒及疫苗的方法，利用生物反应器，以细胞微载体悬浮培养系统大规模生产狂犬病病毒及疫苗：将制备疫苗用细胞接种到含有培养液与微载体的载体罐中，使细胞贴附在微载体上；在适当培养环境下，使细胞在上述微载体上生长至接种浓度的5～20倍；将狂犬病毒制成病毒悬液，使其吸附到上述细胞上；换用细胞维持培养液，在适当培养环境下培养病毒；连续培养3～5日后，第一次收获病毒液，采用半连续工艺，换液比例为50％；继续培养9～11日，每24h收获换液一次；将收获的病毒液与生物反应器的病毒液混合，于-20℃常温反复冻融两次，灭活纯化后加入佐剂制备狂犬病疫苗。该方法生产规模大、单批次产量高、生产成本相对较低。

主权项

一种兽用狂犬病病毒的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：1)微载体生物反应器中，微载体密度为40～80g/L，加入2.0×107～5.0×107cells/g微载体的传代细胞及细胞生长液，启动细胞吸附程序，使微载体与传代细胞充分结合后，启动细胞培养程序，培养传代细胞；2)上述传代细胞培养至4.0×109cells/L～8×1010cells/L时换用细胞维持液，按照感染复数为M.O.I.＝0.001～1接种狂犬病病毒，启动病毒吸附程序，使病毒与微载体上的细胞吸附完全后，换用病毒培养程序，扩增狂犬病病毒；3)采用半量换液连续收毒工艺，病毒培养2～5天后，第一次收获病毒液，收获比例为总培养体积的50％，继续培养9～11天后，每24h收获换液一次，收获比例为总培养体积的50％，收获狂犬病病毒。