[发明专利]基于重组UL51蛋白的鸭瘟病毒抗体的检测方法

摘要

本发明涉及动物医学领域，特别涉及用于检测鸭瘟病毒抗体的方法，具体包括固相抗原的制备、一抗结合、二抗结合、显色及检测并判定等步骤，本方法是基于纯化的重组UL51蛋白建立的间接ELISA法，其特异性好，对鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、鸭疫里默氏菌(RA)、鸭大肠杆菌(E.coli)的阳性血清进行检测，结果均为阴性；该方法的批内或批间重复试验显示变异系数均小于10％，能检出经1∶3200倍稀释的DPV疫苗免疫鸭阳性血清。

主权项

基于重组UL51蛋白的鸭瘟病毒抗体的检测方法，其特征在于，具体步骤为：a固相抗原的制备：将包被浓度大于或等于2.5μg/100μL的重组UL51蛋白液与固相载体连接，用封闭液封闭，洗涤去除未结合的抗原及杂质，得固相抗原；b一抗结合：将待检血清作体积小于或等于200倍的稀释，得稀释血清，即一抗，通过保温反应使所述稀释血清与步骤a所得固相抗原结合形成固相抗原抗体复合物，洗涤去除固相载体上杂质；c二抗结合：将酶标二抗作体积小于或等于2000倍的稀释，得酶标二抗稀释液，将所述酶标二抗稀释液与步骤b所得固相抗原抗体复合物结合，得抗原‑抗体‑二抗复合物；d显色：在步骤c所得抗原‑抗体‑二抗复合物中加入色原底物避光显色后，加入终止液终止反应得显色样品液；e检测及结果判定：将步骤d所得显色样品液用酶标仪测定OD450nm值，当OD450nm值＞0.216时判为阳性，当OD450nm≤0.216时判为阴性。