[发明专利]野生茄子耐盐基因StNHXl植物表达载体

摘要

本发明涉及野生茄子‘Torvum Vigor’(Solanum torvum Swartz)Na+/H+反向转运体耐盐基因(Na+/H+antiporter gene，StNHX1)植物表达载体的构建，属于分子生物学领域。根据番茄(Solanum lycopersicum)NHX1基因序列，设计引物在野生茄子中扩增StNHX1基因(含有BamH I、Sac I酶切位点)，将StNHX1片段替换pBI121的GUS CDS，酶切pBI121载体后将35S prom-StNHX1-NOS term片段连接到pCAMBIA1301质粒，构建成植物表达载体pCAMBIA1301-StNHX1。该植物表达载体转化大豆后将会提高其耐盐性，对提高我国大豆分子育种的技术水平具有重要理论和实践意义。

主权项

野生茄子耐盐基因StNHX1植物表达载体，其构建方法为：1)野生茄子‘Torvum Vigor’中StNHX1耐盐基因的克隆：以野生茄子‘Torvum Vigor’幼嫩叶片为材料，提取叶片总RNA，取2μg总RNA反转录cDNA，设计引物在野生茄子‘Torvum Vigor’叶片cDNA中扩增StNHX1基因：上游引物F：5’‑GCCGGATCCGCCACCATGGGGTTGGATG‑3’下游引物R：5’‑CCCGAGCTCTCAATGACCACATCCTC‑3’将PCR产物连接到pMD19‑T载体上，命名为pMD19‑StNHX1，测序验证；2)StNHX1基因连接至pBI121质粒：BamH I/Sac I双酶切质粒pMD19‑StNHX1回收StNHX1片段，同样双酶切pBI121质粒回收pBI121‑GUS‑；将回收的两片段用T4连接酶连接，命名为p121‑GUS‑‑StNHX1，转化DH5α感受态细胞；3)StNHX1基因连接至pCAMBIA1301质粒构建植物表达载体：HindIII/EcoR I双酶切pBI121‑GUS‑‑StNHX1回收35S prom‑StNHX1‑NOS term片段，同样双酶切pCAMBIA1301质粒回收其大片段；将回收的两片段用T4连接酶连接，命名为pCAMBIA1301‑StNHX1，转化DH5α感受态细胞后进行PCR和酶切验证，构建成功。