[发明专利]辅助底物耦联提高重组菌不对称转化(R)-苯基乙二醇效率的方法

摘要

辅助底物耦联提高重组菌不对称转化(R)-苯基乙二醇效率的方法，属于生物催化不对称转化技术领域。本发明理性构建辅助底物耦联体系，实现良性的辅酶再生循环，大幅度提高(R)-苯基乙二醇的制备效率，以mRNA二级结构优化后的重组大肠杆菌BL21/pET32a-mrcr为生物催化剂，保藏编号CCTCCNO：M209289，通过添加不同比例的辅助底物甘油和/或异丙醇，提高底物的溶解性，构建底物耦联再生辅酶循环体系，使反应时间由48h缩短为1.5h，实现了高底物浓度下的(R)-苯基乙二醇的高效转化，这种经济简便的全细胞辅酶再生的方法，为重组菌高效、低成本制备光学纯(R)-苯基乙二醇提供了有效途径，以及手性醇的工业生产奠定了坚实的基础。

主权项

一种利用重组菌CCTCC NO：M 209289不对称转化制备(R)‑苯基乙二醇效率的方法，其特征在于以2‑羟基苯乙酮为底物，进行不对称转化反应：在0.1 mol/L、pH 8.0~9.0的Tris‑HCl缓冲液中，底物2‑羟基苯乙酮浓度为5~10 mg/mL，添加占反应体系总质量6%~10%的甘油和/或6%~10%的异丙醇，然后：釆用重组菌全细胞生物转化：添加重组菌CCTCC NO：M 209289细胞浓度为0.1 g/mL，混匀后于30℃反应1.5‑48 h，反应过程中不需要加入辅酶，产物为(R)‑苯基乙二醇；或釆用重组菌CCTCC NO：M 209289的细胞破碎后经纯化后的重组蛋白生物转化：重组蛋白浓度为1~2 μg/mL，再加5 mmol/L辅酶NADH，混匀后于30℃反应8 h，产物中(R)‑苯基乙二醇纯度达80%以上。