[发明专利]一种花生体胚诱导及植株再生的方法

摘要

本发明提供一种花生体胚诱导及植株再生的方法，可以解决现有技术存在的植株再生频率低的问题。主要步骤是将表面消毒并浸泡好的花生种胚分离胚小叶，接种到添加5～10mg/L2，4-D的诱导培养基中培养形成体胚，然后转移到添加了4mg/LBAP的体胚萌发培养基上，继代两次后得再生苗；当体胚萌发伸长后从基部切下，转移至添加0.2～0.5mg/LNAA的1/2MS无机盐+B5有机的生根培养基中诱导生根得完整植株。通过以花生成熟种子胚小叶为外植体，在5～10mg/L2，4-D的诱导培养基上及4mg/L BAP的体胚萌发培养基上，体胚诱导率及植株再生率高，同时体细胞胚起源于一个细胞，避免了再生植株的嵌合性。

主权项

一种花生体胚诱导及植株再生的方法，其特征在于包括如下步骤，(1)制备体胚诱导培养基：选取MSB5为基本培养基，在所述基本培养基中添加2，4‑D制成体胚诱导培养基，2，4‑D的添加量为每升所述基本培养基中添加5～10mg；(2)选择外植体材料：将花生种子去子叶后的种胚表面消毒，取胚小叶为外植体材料；(3)按以下步骤进行体胚诱导及植株再生：a将花生种子去子叶后的种胚进行表面消毒，然后用无菌水漂洗后，置于装有无菌水的广口瓶中浸泡12～16h；b取出经表面消毒浸泡好的种胚，置于无菌培养皿中分离种胚的胚小叶，接种到所述诱导培养基中进行诱导培养，25～30d后形成体胚；c将形成有体胚的外植体转移至体胚萌发培养基上进行萌发培养，每隔25～30d继代一次，继代两次后得到再生苗；所述体胚萌发培养基是由选取MSB5为基本培养基，在所述基本培养基中添加BAP形成，BAP的添加量为每升所述基本培养基中添加4mg；d当再生苗生长至2～3cm时，从基部切下，转移至生根培养基中诱导生根，获得完整植株；所述生根培养基是由选取1/2MSB5为基本培养基，在所述1/2MSB5基本培养基中添加NAA形成，NAA的添加量为每升所述基本培养基中添加0.2～0.5mg。