[发明专利]金黄色葡萄球菌肠毒素基因PCR分型检测试剂盒及方法

摘要

本发明涉及一种利用PCR方法检测金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB、SEC、SEE的基因分型检测试剂盒和方法，属于生物检测试剂领域。该试剂盒包括扩增反应液，分型反应液A、B、C、E，Taq酶，ddH2o，SEA、SEB、SEC、SEE的阳性标准品。其中分型反应液A中包含SEA引物：SEA-F，SEA-R；分型反应液B中包含SEB引物：SEB-F，SEB-R；分型反应液C中包含SEC引物：SEC-F，SEC-R；分型反应液E中包含SEE引物：SEE-F，SEE-R。检测方法包括细菌DNA的提取，同一台PCR仪及同一条件下，利用本发明设计的分型引物，同时进行肠毒素SEA，SEB，SEC，SEE基因的分型检测，电泳显示结果，该检测快速、准确、灵敏度高且成本低。

主权项

一种金黄色葡萄球菌肠毒素基因PCR分型检测试剂盒，其特征在于，包括：(1)扩增反应液成分：10×Taq DNA Polymerase Buffer、150～250mM dNTP、ddH2O；(2)分型反应液A：包含SEA上、下游引物各20uM：SEA‑F：5′‑CCGAGTCACGATCAATTTTTACAG‑3′SEA‑R：5′‑GCGGCTTGTATATAAATATATATCA‑3′；(3)分型反应液B：包含SEB上、下游引物各20uM：SEB‑F：5′‑AATCTATAGATCAATTTCTATAC‑3′SEB‑R：5′‑CTTTTTCTTTGTCGTAAGATA‑3′；(4)分型反应液C：包含SEC上、下游引物各20uM：SEC‑F：5′‑GTCTGTAGATAAATTTTTGGCA‑3′SEC‑R：5′‑TCCATTCTTTGTTGTAAGGTG‑3′；(5)分型反应液E：包含SEE上、下游引物各20uM：SEE‑F：5′‑GGCCTATAGATAAAGTTAAAACAAGC‑3′SEE‑R：5′‑CACCTTACCGCCAAAGCTG‑3′；(6)Taq plus DNA Polymerase：2.5U/ul；(7)SEA阳性标准品、SEB阳性标准品、SEC阳性标准品、SEE阳性标准品分别为10～200ng/ul的金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB、SEC、SEE基因组DNA；(8)阴性对照品为ddH2O。