[发明专利]半巢式-RT-Realtime PCR检测马铃薯X病毒的试剂盒无效
| 申请号： | 201010560492.1 | 申请日： | 2010-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN102080132A | 公开（公告）日： | 2011-06-01 |
| 发明（设计）人： | 粟智平;李明福;耿金培;杨益娥;张京萱;栾晶 | 申请（专利权）人： | 烟台出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 264000 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了半巢式-RT-Realtime PCR检测马铃薯X病毒的试剂盒，包括TaqMan探针与引物的设计、植物总RNA提取及质量控制、将RNA反转录合成cDNA和实时荧光PCR检测。本方法有机地结合了实时荧光PCR和巢式PCR技术：在实时荧光PCR引物的外侧按照巢式PCR的设计原理增设了一条正链引物，反链引物分别与两条正链引物配对形成两套独立的PCR反应，并共用一条TaqMan探针。本发明的优点在于：引物极高的扩增效率保证了检测的高灵敏度，有效提高了检测的灵敏度，三条引物形成的两套PCR体系进行相互验证，极大地提高了检测的准确性，简化了操作并缩短了检测周期，全封闭的操作系统减少了污染。 | ||
| 搜索关键词： | 半巢式 rt realtime pcr 检测 马铃薯 病毒 试剂盒 | ||
【主权项】：
半巢式‑RT‑Realtime PCR检测马铃薯X病毒的试剂盒，其特征在于包括以下步骤制备而成：根据马铃薯X病毒全基因组中外壳蛋白基因序列保守区，设计三条引物和一条TaqMan探针；(1)从植物叶片中提取总RNA并测定其OD值；(2)将提取的植物总RNA反转录合成cDNA；(3)实时荧光PCR检测，包括引物探针的特异性检测和灵敏度检测。
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