[发明专利]甘薯病毒病害SPVD的多重RT-PCR检测方法有效
| 申请号： | 201010565665.9 | 申请日： | 2010-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN102108419A | 公开（公告）日： | 2011-06-29 |
| 发明（设计）人： | 张振臣;张德胜;乔奇;秦艳红;田雨婷;王永江 | 申请（专利权）人： | 河南省农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 郑州大通专利商标代理有限公司 41111 | 代理人： | 张爱军 |
| 地址： | 450002 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种危险性甘薯病毒病害SPVD的多重RT-PCR检测方法，先分别合成甘薯褪绿矮化病毒的引物、甘薯羽状斑驳病毒的引物、甘薯羽状斑驳病毒CH株系的上游引物，然后提取感染SPVD的甘薯叶片的总RNA作为PCR模板，进行反转录；将上述引物置于PCR反应体系中，以反转录产物作为模板，进行PCR扩增；PCR反应程序为：94℃预变性3min,94℃变性30s,54℃退火30s,72℃延伸40s,30个循环，最后72℃延伸10min；最后用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。本发明建立了在一次PCR反应中即可检测出甘薯病毒病害SPVD是否存在的方法，并且可有效区分SPFMV的株系类型，检测效率提高，并能对SPVD的危险程度及时预警，为该病防控提供可靠依据。 | ||
| 搜索关键词： | 甘薯 病毒 病害 spvd 多重 rt pcr 检测 方法 | ||
【主权项】：
甘薯病毒病害SPVD的多重RT‑PCR检测方法，其特征在于，（1）分别合成甘薯褪绿矮化病毒的引物CSV 1和CSV 2；甘薯羽状斑驳病毒的引物FMV 1和FMV 2；甘薯羽状斑驳病毒CH株系的上游引物FMVCH，甘薯羽状斑驳病毒CH2株系的上游引物FMVCH2，所述引物序列为：CSV 1：5＇‑AGTGGTGAYGTAATAGTCGGTGG‑3＇， CSV 2：5＇‑GCTAACGATTCACADACAGACTTCA‑3＇，FMV 1：5＇‑GARCARTTYCRMGCATGGTATGA‑3＇，FMV 2：5＇‑GAAGTGYGTCATRATYTGCCTAA‑3＇，FMVCH：5＇‑GCGTGATACGAGCAAAGAAAAGG‑3＇，FMVCH2：5＇‑ CCAAAAGGGGCATTTACAGCACC‑3＇，其中Y为C或T，D为G、A或T，R为A或G，M为A或C；（2）提取感染SPVD的甘薯叶片的总RNA作为PCR模板，进行反转录； （3）将所述CSV 1、CSV 2、FMV 1、FMV 2、FMVCH和FMVCH2引物置于PCR反应体系中，以反转录产物作为模板，进行PCR扩增；（4）用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。
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