[发明专利]一种同时纯化和固定化亚油酸异构酶的方法

摘要

本发明公开了一种同时纯化和固定化亚油酸异构酶的方法，凹凸棒土盐酸处理，氢氧化钠溶液调节pH，搅拌均匀，过滤，水洗，干燥，得酸改性凹凸棒土；酸改性凹凸棒土与硫酸镁溶液混合，搅拌，过滤，干燥得硫酸镁处理凹凸棒土；硫酸镁处理凹凸棒土与γ-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅、水、二甲苯搅拌混合，过滤，水洗，干燥，得改性凹凸棒土；产自德氏乳杆菌保加利亚亚种亚油酸异构酶酶液和改性凹凸棒土混合，搅拌，过滤，干燥，得纯化固定化亚油酸异构酶。该酶纯化和固定化方法简便，步骤少，成本低，纯化效果好，固定化效率高，纯化过程酶活回收率达60%以上，固定化酶具有较好的pH适应性、热稳定性及操作稳定性。

主权项

一种同时纯化和固定化亚油酸异构酶的方法，其特征在于该纯化和固定化方法包括以下步骤：(1) 按安徽农业科学2010年 15期所述文章“德氏乳杆菌保加利亚亚种产亚油酸异构酶研究制备”的记载制备亚油酸异构酶发酵液，8000rpm离心10min，收集菌体，按发酵液：缓冲液为5:2的体积比将菌体悬浮于0.1mol/L pH=6.0的柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲溶液中得缓冲液，同时添加质量占缓冲液体积0.5%的溶菌酶及质量占缓冲液体积0.2%的蜗牛酶，搅拌60min，离心10min，得上清粗酶液，在粗酶液中添加质量占缓冲液体积0.02%的阳离子聚丙烯酰胺絮凝剂，搅拌10‑15min，过滤，收集滤液；(2)按滤液与改性凹凸棒土以质量比4:1向依据步骤（1）获得的滤液中加入改性凹凸棒土，室温搅拌10‑15h，真空过滤，得纯化和固定化亚油酸异构酶。