[发明专利]一种纯化重组人胰岛素原的方法

摘要

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种重组人胰岛素原的纯化方法，特别涉及一种利用大孔吸附树脂和阳离子交换树脂纯化重组人胰岛素原的方法。本发明将重组人胰岛素原复性液通过大孔吸附树脂吸附浓缩，后上样至阳离子交换树脂进一步纯化，收集的胰岛素原不仅收率和纯度高，而且可直接用于酶切从而得到胰岛素。本方法操作简便，工艺衔接性好，适合于工业化生产。

主权项

一种纯化重组人胰岛素原的方法，其特征在于包含以下步骤，a.大孔吸附树脂层析：用乙酸调pH为3.0～5.0的去离子水平衡大孔吸附树脂，将盐酸调pH为3.0～5.0的重组人胰岛素原复性液上样至大孔吸附树脂层析柱，上样流速为200～500cm/h，再用乙酸调pH为3.0～5.0的去离子水清洗5～10个柱体积，清洗流速为200～500cm/h，最后用乙酸调pH为3.0～5.0、浓度为65％～95％的乙醇解吸附洗脱，洗脱流速为50～200cm/h，收集解吸附洗脱液；b.阳离子交换树脂层析：大孔吸附树脂层析得到的解吸附洗脱液与去离子水等体积混合后用盐酸调pH为5.0～7.0，室温静置1～2小时后出现絮状沉淀，离心取上清液并用盐酸复调pH为3.0～5.0；先用乙酸调pH为3.0～5.0的去离子水平衡阳离子交换树脂，将pH为3.0～5.0的上清液上样至阳离子交换树脂层析柱，上样流速为50～200cm/h，再用乙酸调pH为3.0～5.0的去离子水清洗5～10个柱体积，清洗流速为50～200cm/h，最后用pH为8.5～10.5、0.1mol/L的碳酸氢铵洗脱，洗脱流速为50～200cm/h，收集洗脱液。