[发明专利]一种由苏云金杆菌发酵液制备活性毒素的方法

摘要

本发明公开了一种由苏云金杆菌发酵液制备活性毒素的方法。该方法首先将苏云金杆菌发酵液离心去除上清液，沉淀物用水悬浮后加碱处理，或直接用稀碱液调配成悬浮液，直接获取含有活性毒素的悬浮液，然后经过离心、超滤、等电点沉淀、洗涤、冷冻干燥等操作，制备活性毒素干粉末。本发明的方法简便，成本低，与普通方法相比缩短了提取周期短，且提取量大。同时克服了伴胞晶体与芽胞分离操作中对发酵液固形物含量的限制，可以对大量胞晶混合物进行碱溶，提取量明显提高。

主权项

一种由苏云金杆菌发酵液制备活性毒素的方法，其特征在于按照下列步骤操作：（1）将苏云金芽胞杆菌发酵液装入离心管，高速离心去除上清液，得到胞晶混合物沉淀物；（2）将步骤1所得的胞晶混合物沉淀物，用去离子水调配成固形物含量的重量与体积比为5%‑15%的悬浮液，在搅拌下水浴升温，在30‑60℃条件下滴加1mol/L NaOH溶液，维持溶解体系的pH在10—12之间，碱解4—5 h，得到伴胞晶体的碱溶解液； 或者：将步骤1所得的胞晶混合物沉淀物，直接用0.01‑0.05 mol/L碳酸钠溶液调配成悬浮液，固形物含量的重量与体积比在5%‑15%之间，在搅拌下升温，在30‑60℃条件下碱解4—5 h；碱解期间用0.5mol/L Na2CO3溶液调节悬浮液pH在10—12之间；（3）将步骤2所得的伴胞晶体的碱溶解液离心去沉淀，收集上清液；（4）将步骤3所得的上清液用截留分子量≤60kDa的离心过滤装置过滤，滤除小分子物质；（5）收集步骤4中被截留的活性毒素，采用等电点法对活性毒素进行沉淀；（6）步骤5所得的活性毒素沉淀用去离子水洗涤，离心脱水后冷冻干燥，得浅棕色粉末。