[发明专利]一种溶藻减负复合生物制剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种溶藻减负复合生物菌剂的制备方法，其步骤：A、Ⅰ、Ⅱ级菌种培养：(1)培养基；(2)Ⅰ级种子培养；(3)Ⅱ级种子培养；B、Ⅲ级种子：(1)、溶藻菌Ⅲ级种子：(2)、减负复合菌剂Ⅲ级种子：C、规模化生产方法：(1)培养基：(2)溶藻菌规模化发酵生产；(3)减负复合菌剂规模化发酵生产；(4)溶藻减负复合生物制剂配比与包装。方法易行，操作简便，降低了富营养化水体，控制了蓝藻水华爆发。该菌剂易于培养，成本低，适宜工厂化生产。本发明溶藻减负复合生物菌剂易于培养，成本低，适宜工厂化生产。对水体无污染。具有环境、社会效益。

主权项

一种溶藻减负复合生物菌剂的制备方法，其步骤是：A、Ⅰ、Ⅱ级菌种培养： (1)培养基：① 溶藻菌培养基：牛肉膏1‑5g 、  蛋白胨8‑12g 、 氯化钠 3‑7g 、 水1000ml、 琼脂1.5‑2.5% 、  pH=7.0‑7.8；  ② 减负复合菌剂培养基： 红糖 80‑120g 、 磷酸氢二钾0.01‑0.05g、硫酸镁和0.01‑0.03g 、 水1000ml 、 pH=6.8‑7.4；(2)Ⅰ级种子培养：① 无菌室消毒：接种应在无菌室内的超净工作台上进行，接种前将无菌室内和超净工作台内的紫外灯同时打开，灭菌； ② 接种：试管、平板和三角瓶接种应在超净工作台内进行；  ③ 培养：菌种接种后应放在培养架上或生物培养箱内培养，温度控制在25‑29℃；(3) Ⅱ级种子培养：   ① 无菌室消毒：同Ⅰ级种子培养中的第一步①；② 接种：试管、平板和三角瓶接种应在超净工作台内进行,操作人员必须穿戴消毒过的工作服和工作帽，接种前手用体积分数75%的酒精消毒后再开始操作，接种针或环必须在酒精灯上烧红3次，进行接种，将试管斜面或在培养皿平板培养好的Ⅰ级菌种，用接种针和接种环，将菌种转接到三角瓶液体中，操作时接种物在酒精灯的火焰边进行，接种完毕后立即用棉塞将试管封口或立即盖上三角瓶；③ 培养：a、溶藻菌Ⅱ级菌种接种后应放在恒温摇床上振动培养，温度控制在25‑29℃，每天摇动2‑3次；B、减负复合菌剂Ⅱ级菌种接种后室温静置培养；④ Ⅱ级菌种培养5‑7天后，进行Ⅲ级种子培养；B、 Ⅲ级种子：(1)、 溶藻菌Ⅲ级种子：①培养基配制：先用40‑60℃的温水将牛肉膏、蛋白胨分别溶化，加井水，然后加入氯化钠，其中按每升分别将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠的比列在混合器中搅拌均匀，再分别装入25L的清洗干净的塑料壶中；② 接种：待本步骤第一步①培养基融化后，冷却到29‑31℃，再加入250‑350mLⅡ级溶藻菌菌种，然后把接种好的菌水塑料壶用棉塞或牛皮纸包扎；③发酵：在壶口插上通气和出气管各一支，在28‑32℃条件下通气发酵培养，5‑7天后发酵完成，生产种子；(2)、 减负复合菌剂Ⅲ级种子：① 培养基配制：先烧开10000ml的水，温度在90‑100℃，加1000g的红糖，把红糖融化开，把红糖里面的有害菌消除，然后分别加入0.01‑0.03g硫酸镁和0.01‑0.05g磷酸氢二钾；② 接种：待本步骤第一步①培养基融化后，冷却到29‑31℃，然后接种1000gⅡ级减负复合菌剂菌种；③ 发酵：后把10000g的菌水整体装进容器中，密封发酵，6‑8天后，打开瓶口，闻到酸甜发酵成功；C、规模化生产方法：(1)培养基：① 溶藻菌培养基：牛肉膏1000‑2000g   蛋白胨4000‑6000g  氯化钠 3000‑7000g  水1m3   pH=7.5；  ② 减负复合菌剂培养基：红糖400000‑60000g 、 磷酸氢二钾1000‑5000g 、  硫酸镁1000‑3000g  、 水10m3 ；  (2) 溶藻菌规模化发酵生产：     先用40～60℃的温水，将牛肉膏、蛋白胨分别溶化，然后加入氯化钠，其中牛肉膏、蛋白胨和氯化钠以每方分别1000‑2000g、4000‑6000g、3000‑7000g在混合器中搅拌均匀，再放入1‑10m3的培养池中，加溶藻菌Ⅲ级种子0.1‑1m3，然后加井水至1‑10m3，最后用塑料薄膜密封，28‑32℃发酵培养；(3) 减负复合菌剂规模化发酵生产：先用开水，温度控制在90‑100℃，将红糖溶化，加井水500L,然后按每10 m3加入红糖，硫酸镁和磷酸氢二钾 的量,在混合器中搅拌均匀，再放入10‑20m3的培养池中，加溶藻减负复合菌1‑2m3，然后加井水至10‑20m3，最后用塑料薄膜密封，28‑32℃发酵培养；(4) 溶藻减负复合生物制剂配比与包装：   1）将发酵生产好的溶藻菌和减负复合菌按照3：7的比例混合；2） 产品用50L‑1m3塑料桶包装；3）抽样对产品按照企业标准进行检查，检查合格后贴上检验合格证。