[发明专利]快速检测柯萨奇病毒A16型的荧光定量PCR试剂盒

摘要

本发明公开了一种快速检测柯萨奇病毒A16型的荧光定量PCR试剂盒，涉及一种引起人类多种疾病病原体基因检测技术，适用于柯萨奇病毒A16型定性定量检测。该试剂盒包括RNA提取液、荧光定量PCR反应液、CA16标准阳性模板PMD18-T-CA16和阴性质控标准品，所述的荧光定量PCR反应液含有柯萨奇病毒A16型特异性引物对和荧光探针。本发明定量准确；检测速度快；特异性好，灵敏度高；可鉴定区别检测柯萨奇病毒A16型；使用步骤简单，可重复性高。本试剂盒可对柯萨奇病毒A16型进行快速定性定量检测，并可替代一直沿用的传统的培养法。

主权项

一种快速检测柯萨奇病毒A16型的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于包括：RNA提取液、荧光定量PCR反应液、CA16标准阳性模板PMD18‑T‑CA16和阴性质控标准品；所述的荧光定量PCR反应液含有柯萨奇病毒A16型特异性引物对和荧光探针；正向引物为5′‑TCARTTCYATGGCTACAGGTYAAGR‑3′，反向引物为5′‑CTAGRCATTGCTYGTGATTCTG‑3′，其中正向引物可向5’和3’端方向各延伸10个碱基，反向引物可向5’和3’端方向各延伸10个碱基；荧光探针序列为5′‑TGCTCATCGCCTACACCY‑3′，该荧光探针序列可向5’和3’端方向各延伸10个碱基，荧光探针5′端标记报告荧光基团FAM，3′端标记不发光的淬灭基团标记Eclipse，可以大大减少背景噪音的干扰，CA16标准阳性模板PMD18‑T‑CA16是含有柯萨奇病毒A16型VP1基因的85个碱基对的核苷酸片段构成的PMD18‑T载体，该载体在大肠杆菌DH5α中增殖。