[发明专利]一种适用于赤藓红色素的人工抗原的合成方法

摘要

一种适用于赤藓红色素的人工抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明以荧光素FLS为半抗原，用活性酯法将其与载体蛋白牛血清白蛋白BSA偶联，即得赤藓红的人工抗原荧光素FLS-牛血清白蛋白偶联物；用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定偶联物的偶联比。本发明成功合成了荧光素FLS-牛血清白蛋白偶联物，即是适用于赤藓红色素的人工抗原。本发明合成步骤简洁，有效，完全可用于免疫分析中，为以后人们的研究提供了必需的人工抗原，可以满足国内对其研究的需要。

主权项

一种适用于赤藓红色素的人工抗原的合成方法，其特征是以荧光素FLS为半抗原，用活性酯法将其与载体蛋白牛血清白蛋白BSA偶联，用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定偶联物的偶联比；步骤为：（1）人工抗原的合成：投料配比为荧光素FLS︰N‑羟基硫代琥珀酰亚胺︰碳二亚胺︰牛血清白蛋白的摩尔比控制为60︰68︰90︰1；荧光素FLS溶于含二甲基吡啶的戊二酸酐的无水乙醇和吡啶混合溶液中，75℃搅拌24h后用真空旋转蒸发提纯，再加N,N‑二甲基甲酰胺DMF溶剂溶解后，加入N‑羟基硫代琥珀酰亚胺和碳二亚胺搅拌反应8h，为A液；牛血清白蛋白溶于0.01M、pH7.4的PBS缓冲液中，为B液；将A液逐滴加入到B液中，室温下搅拌反应6h，离心取上清液，获得荧光素FLS‑BSA偶联物混合液，即为适用于赤藓红的人工抗原混合液；透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；将人工抗原混合液移入透析袋中，用每次2L的0.01M的pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液透析，透析2次，再用每次2L的去离子水透析，透析2次，共透析3天；最后使用冻干法将透析袋中的液体制成粉末，获得荧光素FLS‑BSA偶联物，即为适用于赤藓红的人工抗原；（2）人工抗原的鉴定：荧光素FLS‑BSA偶联物采用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其偶联比。