[发明专利]改进的2-酮基-L-古洛糖酸的生产

摘要

本发明涉及用于生产2-酮基-L-古洛糖酸(2-KGA)和/或L-抗坏血酸(下文也称为维生素C)的重组微生物(特别是Gluconobacter属的)的生产，其中所述微生物已被修饰，以过量表达L-山梨糖脱氢酶(SDH)。通过将编码SDH的多核苷酸的一个或多个拷贝引入宿主微生物的基因组中，来实现该过量表达，导致较之未经修饰的微生物的2-KGA和/或维生素C生产的产率、产量和/或效率提高。sdh的所述一个或多个额外拷贝的表达依赖于整合位点。本发明还涉及经遗传工程改造的微生物和它们用于生产2-KGA和/或维生素C的用途。

主权项

重组微生物，其包含整合的多核苷酸片段，所述片段含有编码具有L 山梨糖脱氢酶(SDH)活性的蛋白的多核苷酸或此类多核苷酸的互补链，所述多核苷酸选自下述组，所述组由：(a)编码包含根据SEQ ID NO：2的氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)包含根据SEQ ID NO：1的核苷酸序列的多核苷酸；(c)包含下述核苷酸序列的多核苷酸，所述核苷酸序列可使用来自微生物的基因组DNA作为模板，并使用根据SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的引物组，通过核酸扩增，例如聚合酶链式反应来获得；(d)多核苷酸，所述多核苷酸包含编码被(a)至(c)中任一项的多核苷酸编码的多肽的片段或衍生物的核苷酸序列，其中，在所述衍生物中，一个或多个氨基酸残基较之所述多肽被保守取代，并且，所述片段或衍生物具有SDH多肽的活性；(e)编码SDH多肽的多核苷酸，所述多核苷酸的互补链能在严谨条件下与(a)至(d)中任一项所定义的多核苷酸杂交；以及(f)编码SDH多肽的多核苷酸，所述多核苷酸与(a)至(d)中任一项所定义的多核苷酸至少70％相同，例如85％、90％或95％相同；构成并且其中所述多核苷酸被整合进重组微生物的基因组中。