[发明专利]猪圆环病毒Ⅱ型毒种的制备和保存方法有效
| 申请号： | 201110001417.6 | 申请日： | 2011-01-05 |
| 公开（公告）号： | CN102154221A | 公开（公告）日： | 2011-08-17 |
| 发明（设计）人： | 刘长辉;赵亚荣;王忠山;王贵华 | 申请（专利权）人： | 北京大北农科技集团股份有限公司;福州大北农生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100080 北京市海淀区中*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明属于兽医生物技术领域，涉及一种猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）毒种的制备及其保存方法。本发明包括如下步骤：（1）接种用细胞的制备；（2）病毒的接种培养；（3）传代；（4）连续传代；（5）保存。本发明方法毒种制备工艺简单、稳定、易操作，批间差异小和质量易控。同时，本发明通过保存方式的改进，可获得高滴度病毒，提高毒种的质量，利于PCV2疫苗等制剂的生产和相关诊断试剂的制备。 | ||
| 搜索关键词： | 圆环 病毒 型毒种 制备 保存 方法 | ||
【主权项】：
一种猪圆环病毒II型(Porcine circovirus type 2)毒种的制备和保存方法，其特征在于步骤如下：(1)接种用细胞的制备PK15细胞按常规条件培养24小时后，80‑90％细胞融合时作为接种用细胞；(2)病毒的接种培养取接种用细胞，弃去生长培养基，以毒种：接种用细胞为1‑10％(v/v)或病毒滴度为103.0‑106.0TCID50/mL的比例接入猪圆环病毒II型毒种，37℃吸附1小时后加入维持液进行培养；24小时后用300mM的D‑氨基葡萄糖于37℃处理20分钟，经无菌pH7.4的PBS两次洗涤后加入维持液进行培养；(3)传代取培养后的细胞，弃去维持液，经无菌pH7.4的PBS两次洗涤后，加入细胞分散液，将细胞分散成3‑6×106/mL，定量分装细胞瓶中，37℃培养48‑96小时；(4)连续传代重复步骤(3)，传代3‑6次，得含毒种PK15细胞；(5)保存含毒种PK15细胞置于液氮内进行保存。
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