[发明专利]一种定量评估乳腺癌远期复发风险的试剂盒无效
申请号: | 201110020141.6 | 申请日: | 2011-01-18 |
公开(公告)号: | CN102586410A | 公开(公告)日: | 2012-07-18 |
发明(设计)人: | 姬云;侯青;张泓 | 申请(专利权)人: | 苏州科贝生物技术有限公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;G01N21/64 |
代理公司: | 南京众联专利代理有限公司 32206 | 代理人: | 赵枫 |
地址: | 215123 江苏省苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明涉及功能基因组学和基因表达检测技术、分析技术。具体而言就是在人类功能基因组表达谱范围内筛选可用于乳腺癌转移和预后分子分型的一类基因,并建立检测技术,制备成试剂盒,应用于乳腺癌患者的转移和预后评估。一种定量评估乳腺癌远期复发风险的试剂盒,由21对引物、21条特异性taqman荧光探针、10×RT-PCR缓冲液、2.5mM dNTP混合液、逆转录酶、DNA聚合酶、10×PCR缓冲液和RNA酶抑制剂组成。本发明采用逆转录PCR技术结合taqman荧光定量PCR技术,采用自行设计并优化的逆转录引物、实时PCR引物和taqman荧光探针,整合了逆转录PCR试剂、taqman荧光定量PCR试剂,制成检测试剂盒,操作简单快速,检测结果更为稳定、检测成本也更低。 | ||
搜索关键词: | 一种 定量 评估 乳腺癌 远期 复发 风险 试剂盒 | ||
【主权项】:
一种定量评估乳腺癌远期复发风险的试剂盒,其特征在于:由21对引物、21条特异性taqman荧光探针、10×RT‑PCR缓冲液、2.5mM dNTP混合液、逆转录酶、DNA聚合酶、10×PCR缓冲液和RNA酶抑制剂组成;所述21对引物序列分别如下:(1)CCNB1引物对:包括反向引物CCNB1R和正向引物CCNB1F;所述CCNB1R序列为:GCAGCATCTTCTTGGGCACA;所述CCNB1F序列为AGGTTGTTGCAGGAGACCATG(2)Ki‑67引物对:包括反向引物Ki‑67R和正向引物Ki‑67F;所述Ki‑67R序列为:CAACTCTTCCACTGGGACGATCCG;所述Ki‑67F序列为:CGGCGGACTTTGGGTGCGAC(3)MYBL2引物对:包括反向引物MYBL2R和MYBL2F;所述MYBL2R序列为:CCTTCCTTTTGATGGTAGAGTTCCAGT;所述MYBL2F序列为:TGGGCCGAGATCGCCAAG(4)STK15引物对:包括反向引物STK15R和正向引物STK15F;所述STK15R序列为:GACCTTCAATCATTTCAGGG;所述STK15F序列为:CTCCATCTTCCAGGAGGACC(5)Survivin引物对:包括反向引物SURVR和正向引物SURVF;所述SURVR序列为:AGCTGTCAGCTCTAGCAAAAGGG;所述SURVF序列为:TGCTGTTTTGATTCCCGGGC(6)Bcl2引物对:包括反向引物Bcl2R和正向引物Bcl2F;所述Bcl2R:TTTCCTATGATTTAAGGGCATTTT;所述Bcl2F:CTTCAGATGGACCTAGTACCCACTG(7)SCUBE2引物对:包括反向引物CEGP1R和正向引物CEGP1F;CEGP1R序列为:GACTACAGCCGTGATCCTTATTC;CEGP1F序列为:GAGTGACAATCAGCACACCTGCT(8)ER引物对:包括反向引物EstR1R和正向引物EstR1F;所述EstR1R序列为,CTAGTGGGCGCATGTAGGC;所述EstR1F序列为,GAACGTGGTGCCCCTCTATG(9)PR引物对:包括反向引物PRR和正向引物PRF;所述PRR,GTTGTGCTGCCCTTCCATTG;所述PRF,GAAGCATCAGGCTGTCATTA(10)HER2引物对:包括反向引物HER2R和正向引物HER2F;所述HER2R序列为:TCACCTCTCGCAAGTGCTCC;所述HER2F序列为:TGTGAGAAGTGCAGCAAGCC(11)GRB7引物对:包括反向引物GRB7R和正向引物GRB7F;所述GRB7R序列为,CATGGCCACCAGGGTATTAT;所述GRB7F序列为,TCGCCATCTGCATCCATCTT(12)Cathepsin L2引物对:包括反向引物CTSL2R和正向引物CTSL2F;所述CTSL2R序列为,GCCACCATTGCAGCCCTGA;所述CTSL2F序列为,ACTTGTCTCACTGAGCGAGCA(13)Stromolysin 3引物对:包括反向引物STMY3R和正向引物STMY3F;所述STMY3R序列为,ATTTACAATGGCTTTGGAGGATA;所述STMY3F序列为,GGCCCTGGAGGCTGCAACAT(14)CD68引物对:包括反向引物CD68R和正向引物CD68F;所述CD68R序列为,CCTCTCCTCCACCCTGGGT;所述CD68F序列为,CAATGGTTCCCAGCCCTG(15)BAG1引物对:包括反向引物BAG1R和正向引物BAG1F;所述BAG1R序列为,TCAACCTCTTCCTGTGGACTGTTC;所述BAG1F序列为,CACCGTTGTCAGCACTTGGAATA(16)GSTM1引物对:包括反向引物GSTM1R和正向引物GSTM1F;所述GSTM1R序列为:CAGGCCCAGCTTGAATTTTT;所述GSTM1F序列为:CTCAAGCTATGAGGAAAAGAAGTACAC(17)ACTB引物对:包括反向引物ACTBR和正向引物ACTBF;所述ACTBR序列为,GAAGCATTTGCGGTGGAC;所述ACTBF序列为:TTCCAGCAGATGTGGATCAGC(18)GAPDH引物对:包括反向引物GAPDHR和正向引物GAPDHF;所述GAPDHR序列为,GTGATGGGATTTCCATTGATGA;所述GAPDHF序列为:ATGATTCCACCCATGGCAAA(19)RPLPO引物对:包括反向引物RPLPOR和正向引物RPLPOF;所述RPLPOR序列为:TTTCAGCAAGTGGGAAGGTGTAA;所述RPLPOF序列为:ACCCCATTCTATCATCAACGGGTA(20)GUS引物对:包括反向引物GUSR和正向引物GUSF;所述GUSR序列为,GACACGCAGGTGGTATCAGT;所述GUSF序列为,ATCCCCACTCAGTAGCCAAG(21)TFRC引物对:包括反向引物TFRCR和正向引物TFRCF;所述TFRCR序列为:TAAACTCAGGCCCATTTCCT;所述TFRCF序列为:ACAGCCAACTGCTTTCATTT;所述21条特异性taqman荧光探针的DNA序列分别如下:(1)探针CCNB1‑T序列为:ATGACTGTCTCCATTATTGATCGGTTCA;(2)探针Ki‑67‑T序列为:CGGTGGTTCGACAAGTGGCCTTG;(3)探针MYBL2‑T序列为:AGGGAGGACAGACAATGCTGTGA;(4)探针STK15‑T:CTGTGGCACCCTGGACTACCTGC;(5)探针SURV‑T:TGAGAAGTGAGGGAGGAAGAAGGCAGT;(6)探针Bcl2‑T:TCCACGCCGAAGGACAGCGATG;(7)探针CEGP1‑T:GCTCGGAAGAGGGCCTGAGCTG;(8)探针EstR1‑T:TGCTGGAGATGCTGGACGC;(9)探针PR‑T:CTTACCTGTGGGAGCTGTAAGGTCTTCT;(10)探针HER2‑T:GCCCGAGTGTGCTATGGTCTGGGC;(11)探针GRB7‑T:GGCTCCCCACCCTTGAGAAGTGC;(12)探针CTSL2‑T:GTGGACTGTTCGCGTCCTCAAGGC;(13)探针STMY3‑T:CGGATCCTCCTGAAGCCCTTTTCGC;(14)探针CD68‑T:CCTCCAAGCCCAGATTCAGATTCGAGTC;(15)探针BAG1‑T:GATGGTTGCCGGGTCATGTTAATTGG;(16)探针GSTM1‑T:GACGCTCCTGATTATGACAGAAGCCAGTGG;(17)探针ACTB‑T:GAGTATGACGAGTCCGGCCCCTC;(18)探针GAPDH‑T:ACCGTCAAGGCTGAGAACGGGA;(19)探针RPLPO‑T:GAGTCCTGGCCTTGTCTGTGGAGAC;(20)探针GUS‑T:TTTGGAAAACAGCCTGTTTACTTGAGC;(21)探针TFRC‑T:GGATCTGAACCAATACAGAGCAGACATA;所述各条探针的5’端有FAM修饰,3’端有BHQ‑1修饰。
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