[发明专利]辐射育种高产虫草素的北冬虫夏草种源的生产方法

摘要

辐射育种高产虫草素的北冬虫夏草种源的生产方法，是为了解决目前为提高北虫草的虫草素含量，所采用的通过向培养基中添加一定数量的蛋白源其提高幅度有限，效果不理想的技术问题而设计的。该方法通过辐射、诱变和筛选实现培育目标菌株的目的。目标菌株yccGy1016是通过对出发菌株ycc-01进行特点参数的辐射处理和对变异菌落的筛选纯化，以及对产生虫草素指标的科学检测和栽培稳定性的评价，最后获得该专利所提及的高产虫草素北虫草新菌株的生产方法。经检测菌株ycc Gy 1016产生虫草素能力是出发菌株ycc-01的3.8倍。这一成果对于人工生产功能性北虫草具有重要价值，应用前景广阔。

主权项

辐射育种高产虫草素的北冬虫夏草种源的生产方法，通过低剂量铯137放射性元素辐射后筛选获得，定名为：ycc Gy 1016；具体生产方法是通过下述步骤实现的：1)选择目前生产中广泛使用的北虫草品种ycc‑01作为辐射育种的出发菌株；2)ycc‑01培养基配方：葡萄糖20克、蛋白胨5克、酵母浸粉3克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁2克、复合维生素100毫克及蒸馏水1000毫升，按常规方法生产液体种源；3)按常规方法制备加富PDA培养基，其配方为马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蛋白胨3g，酵母膏2g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，水1000mL；取直径10厘米培养皿同步高压灭菌，倒平板、冷却后涂布稀释1000‑3000倍的含有分生孢子的液体种源菌液0.1‑0.5毫升，均匀涂布于平板上，在18‑25℃避光定植培养24‑36小时，然后转入辐射处理；4)辐射源选择低剂量铯137，剂量50Gy‑500Gy，距离30cm，照射2‑300s，照射后在20℃暗培养2‑7天，然后转入光照培养，光照强度4000‑6000勒克斯，培养时间2‑4天，然后根据菌落生长形态进行菌落筛选；5)菌落筛选，在宏观层面，选择菌落生长正常，边缘整齐、菌丝不徒长，菌丝转色深的菌落；在微观层面通过显微镜进行观察，选择菌丝粗细均匀、细胞核数量多、菌丝分枝适度、分生孢子着生呈念珠状态，选择符合上述要求的菌落挑取保存；6)将挑取菌落进行编号，按常规方法扩繁母种和液体菌种，并进行栽培，对出草正常，子实体形态正常、产量高的菌落制备液体菌种，培养基配方为：葡萄糖20克，蛋白胨5克，酵母浸粉3克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁2克，蒸馏水1000毫升，以出发菌株ycc‑01为对照，常规培养后测定菌丝体中虫草素含量和液体培养基中虫草素含量；7)经过检测，对虫草素含量高菌落进行提纯、复壮；按常规制备液体菌种，按每瓶鲜蚕蛹10个、干小麦20克、饮用水30毫升，灭菌后接种，按常规培养，待出草后选子实体形态好的，进行组织分离获取种源；8)对选择出的产生虫草素高的组织分离种源进行遗传稳定性评价实验，最后筛选得到一株高产虫草素的新菌株，定名为：ycc Gy 1016新菌株。