[发明专利]一种由锌指核酸酶介导的哺乳动物内源基因定向敲除的方法和该锌指核酸酶及其表达载体无效
| 申请号： | 201110027367.9 | 申请日： | 2011-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN102174576A | 公开（公告）日： | 2011-09-07 |
| 发明（设计）人： | 张智英;王令;张婷婷;李亚明;李战伟;任刚;杨涵江;张存芳;雷洁;王瑞;麻丽霞 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/861 | 分类号： | C12N15/861;C12N9/22;C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 712100 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明一种由锌指核酸酶介导的哺乳动物内源基因定向敲除的方法和该锌指核酸酶及其表达载体，属于基因工程技术领域。其中所述的方法包括：(1)内源基因靶位点的选择；(2)构建穿梭载体pAdTrack-CMV-T2A；(3)制备重组ZFN腺病毒载体pAd-T2A-ZFN；(4)腺病毒包装，得到ZFN腺病毒；(5)步骤(4)得到的ZFN腺病毒转染哺乳动物细胞。本发明利用ZFN技术，使动物哺乳细胞基因突变效率达到13％，大大提高了内源基因的定向敲除效率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 核酸酶 哺乳动物 内源 基因 定向 方法 及其 表达 载体 | ||
【主权项】：
一种由锌指核酸酶介导的哺乳动物内源基因定向敲除的方法，包括下述步骤：(1)、内源基因靶位点的选择：根据内源基因序列特异性选择二聚体ZFN识别并结合的靶位点；(2)、构建穿梭载体pAdTrack‑CMV‑T2A；(3)、将步骤(1)中的二聚体ZFN插入步骤(2)中构建的ZFN腺病毒表达载体pAdTrack‑CMV‑T2A中，得到目的质粒pAdTrack‑CMV‑T2A‑ZFN；取Pme I内切酶线性化的该质粒和腺病毒骨架载体pAD‑easy共转化到大肠杆菌BJ5183感受态中同源重组，得到重组ZFN腺病毒载体pAd‑T2A‑ZFN；(4)、腺病毒包装，得到ZFN腺病毒；(5)、步骤(4)得到的ZFN腺病毒转染哺乳动物细胞。
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