[发明专利]鹿布氏杆菌病间接酶联免疫吸附检测法

摘要

鹿布氏杆菌病间接酶联免疫吸附检测法，属于兽医领域。用于鹿布氏杆菌病诊断，提高相对现有技术的诊断水平。本发明的检测方法所用生物材料包括：作为抗原的布氏杆菌猪型2号苗(S2)、酶标抗体兔抗鹿IgG-HRP、标准阳性血清、标准阴性血清、待检血清：检测步骤包括：抗原包被、洗涤、加血清、加兔抗鹿IgG-HRP、加底物液、终止反应、用酶联检测仪在490nm处空白调零，并测每孔的OD值，OD值≥0.32判定为阳性。本发明的积极效果是，以布氏杆菌猪型2号苗(S2)为抗原，兔抗鹿IgG-HRP为酶标抗体，用间接酶联免疫吸附检测诊断鹿布氏杆菌病，和以往的诊断方法相比，具有特异性、敏感性和重复性较好，诊断精确的优点。

主权项

鹿布氏杆菌病间接酶联免疫吸附检测法，其特征是：(1)所用生物材料包括：作为抗原的布氏杆菌猪型2号苗、酶标抗体兔抗鹿IgG‑HRP、标准阳性血清、标准阴性血清、待检血清：(2)检测步骤包括：①抗原包被在酶标板上选定待检血清、阳性血清对照、阴性血清对照、抗原对照、酶标抗体对照、抗体对照孔及底物对照七种培养孔；将经超声波粉碎的布氏杆菌猪型2号苗用抗原稀释液以疫苗比稀释液1∶12.5‑1∶50的比例稀释，等量加入待检血清孔、阳性血清对照孔、阴性血清对照孔及抗原对照孔中，在兔抗鹿IgG‑HRP对照孔、抗体对照孔及底物对照孔中加入与前述抗原液等体积的浓度为50mg/ml的牛血清白蛋白，之后将酶标板置35℃‑42℃温箱孵育2‑4h；②洗涤取出酶标板，甩去微孔中的溶液，向全部待检血清孔和对照孔加入洗液，加入量为将孔加满为止，室温下放置3min以上，然后倒掉，如此反复三次，空干；③加血清将被检血清加稀释液按血清比稀释液1∶50‑1∶200的比例稀释，等量加到待检血清孔中、在阳性血清对照孔和抗体对照孔中加入用8‑10倍标准阳性血清体积的稀释液稀释的阳性血清液，在阴性血清对照孔中加用8‑10倍标准阴性血清体积的稀释液稀释的阴性血清液，在抗原对照孔中加入血清稀释液， 前述材料的加入量均与步骤①中每孔所加抗原液的体积相同，之后置37℃温箱中0.25‑1h后，3×3’洗涤；④加兔抗鹿IgG‑HRP将兔抗鹿IgG‑HRP用抗原稀释液按兔抗鹿IgG‑HRP比稀释液1∶1600‑6400的比例稀释，等量加入全部待检血清孔孔和对照孔中，每孔加入量与步骤①中每孔所加抗原液的体积相同，之后置35℃‑42℃温箱中0.25‑1h后，3×3’洗涤；⑤加底物液在全部待检血清孔和对照孔中加底物液，每孔加入量与步骤①中每孔所加抗原液的体积相同，置35℃‑42℃温箱中0.25‑1h。⑥终止反应取出反应板，在全部待检血清孔和对照孔中加的2M H2SO4，以终止反应，每孔加入量为步骤①中每孔所加抗原液的体积的1/2；⑦使用仪器测量完成步骤⑥的酶标板静止5min后，将其放在酶联免疫检测仪上，在490nm处空白调零，并测每孔的OD值，OD值≥0.32判定为阳性。