[发明专利]一种PheRS酶活测定体系以及PheRS抑制剂的筛选方法

摘要

本发明公开一种优化的PheRS酶活测定体系，以及利用该体系筛选结核分枝杆菌PheRS抑制剂的方法，建立了PheRS蛋白抑制剂的蛋白水平筛选模型。本发明的方法简单、可靠，效率高，成本低，是一种理想的抗生素筛选方法。运用该筛选方法从化合物库的2000个样品中筛选得到可抑制结核分枝杆菌PheRS酶的活性阳性化合物4个(以抑制率大于50％为筛选阳性标准)。从2560个微生物代谢粗提物中得到25个阳性样品(以抑制率大于30％为筛选阳性标准)。4560个样品中筛选阳性率为0.6％。

主权项

一种PheRS酶活测定体系，其特征在于，含有如下浓度的反应物：反应物                终浓度Hepes                 90～110mMMgCl2                 9～11mMPhe                   2.3～2.7mMtRNA                  50μg/100μlATP                   1.8～2.2mMPEP                   0.9～1.1mMNADH                  1.3～1.7mMPheRS                 3.5～4.5μg/100μl肌激酶                1.6～2.0U/100μl丙酮酸激酶            1.6～2.0U/100μl乳酸脱氢酶            1.6～2.0U/100μl。