[发明专利]生产转基因山羊的piggyBac转座子载体构建方法及其应用

摘要

本发明公开了一种能用于生产转基因山羊的piggyBac转座子载体的构建方法，主要步骤包括：①合成一段包含piggyBac转座子发生转座所必需的PB5′端和PB3′端碱基序列，合成时在PB5′端和PB3′端中间预留出多克隆位点，然后将该序列克隆到pBluSKm载体中构建成pBluSKm-PB载体；再将瘤胃特异表达启动子PRD-SPRR II、经密码子偏好性优化的半胱氨酸合成基因cysE和cysM、Neomycin抗性基因和绿色荧光蛋白基因克隆到pBluSKm-PB载体中最终构建成pBluSKm-PB-PRD-cysEM-NEO-EGFP转座子载体。本发明所获得的转座子载体能够满足细胞筛选、倒置荧光显微镜下显微操作和生产转基因山羊等要求。

主权项

一种生产转基因山羊的piggyBac转座子载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：合成一段包含piggyBac转座子发生转座所必需的PB碱基序列然后将该序列克隆到pBluSKm载体中构建成pBluSKm‑PB载体；再将瘤胃特异表达启动子PRD‑SPRR II、经密码子偏好性优化的羊半胱氨酸合成基因cysE和cysM、Neomycin抗性基因和绿色荧光蛋白基因克隆到pBluSKm‑PB载体中最终构建成pBluSKm‑PB‑PRD‑cysEM‑NEO‑EGFP转座子载体，所述的PB碱基序列为：CCCCCCGGTACCCCCTAGAAAGATAGTCTGCGTAAAATTGACGCATGCATTCTTGAAATATTGCTCTCTCTTTCTAAATAGCGCGAATCCGTCGCTGTGCATTTAGGACATCTCAGTCGCCGCTTGGAGCTCCCGTGAGGCGTGCTTGTCAATGCGGTAAGTGTCACTGATTTTGAACTATAACGACCGCGTGAGTCAAAATGACGCATGATTATCTTTTACGTGACTTTTAAGATTTAACTCATACGATAATTATATTGTTATTTCATGTTCTACTTACGTGATAACTTATTATATATATATTTTCTTGTTATAGATATCAGATCTCCCCCCCGCTAGCCCCCCCCGTCGACCCCCCCCATCGATCCCCCCCCCACG    CGTTAAAAGTTTTGTTACTTTATAGAAGAAATTTTGAGTTTTTGTTTTTTTTTAATAAATAAATAAACATAAATAAATTGTTTGTTGAATTTATTATTAGTATGTAAGTGTAAATATAATAAAACTTAATATCTATTCAAATTAATAAATAAACCTCGATATACAGACCGATAAAACACATGCGTCAATTTTACGCATGATTATCTTTAACGTACGTCACAATATGATTATCTTTCTAGGGCCGCGGCCCCCCC。