[发明专利]大肠杆菌O157:H7双重PCR快速检测方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种大肠杆菌O157:H7双重PCR快速检测方法及试剂盒，选取大肠杆菌O157特异性抗原基因rfbE和编码H7鞭毛基因Flic作为扩增靶基因，同时考虑了不同血清型核苷酸同源性，设计了两对特异性引物，用于PCR反应快速检测大肠杆菌O157:H7。本方法操作简便省时、特异性高、灵敏性好，仅能检测大肠杆菌O157:H7而不受大肠杆菌非H7血清型和其他相关菌影响。基于上述双重PCR快速检测方法研制的试剂盒，适合各种样品的大批量检测，为快速检测大肠杆菌O157:H7提供了新的技术手段。

主权项

一种大肠杆菌O157:H7双重PCR快速检测方法，通过双重PCR反应后，经电泳、染色、漂洗、紫外鉴定，其特征在于该方法能同时检出O157和H7基因，其引物序列和扩增序列分别为：引物rfbE‑F序列 5’‑TGT CCA TTT ATA CGG ACA TCC ATG‑3’引物rfbE‑R序列 5’‑CCT ATA ACG TCA TGC CAA ATT GCC‑3’rfbE扩增序列为序列表SEQ.ID.No.3的碱基序列。引物Flic‑F序列 5’‑GCG AAG TTA AAC ACC ACG AC‑3’引物Flic‑R序列 5’‑ACC CGT ACC AGC AGT AGA TT‑3’Flic扩增序列为序列表SEQ.ID.No.6的碱基序列。