[发明专利]一种配对双末端文库构建方法及用该文库进行基因组测序的方法

摘要

本发明涉及一种配对双末端文库构建方法及用该文库进行基因组测序的方法。本发明的配对双末端文库的构建是利用已经构建好的基因组DNA文库，首先对文库中的克隆进行质粒提取，将提取的质粒DNA片段化，对片段化的DNA上限制性内切酶位点进行甲基化保护，接着加发夹型接头、酶切、环化，得到环状的DNA，然后通过一对复合引物将环化DNA中含基因组文库配对双末端的片段扩增出来，得到超长跨度的配对双末端序列，最后进行高通量测序。利用该方法得到的配对双末端序列可应用于新物种基因组序列的拼接，从而进一步提高拼接的质量。

主权项

一种配对双末端文库构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(a) 提取基因组文库中的质粒；(b) 使步骤(a)中的质粒片段化至具有预期尺寸的片段；(c) 利用甲基转移酶使步骤（b）得到的片段上特定的限制性内切酶位点甲基化；(d) 补平步骤（c）得到的片段的末端，并在补平的片段两端连接接头，所述接头具有步骤（c）中所述的特定的限制性内切酶位点，用外切酶消化掉未连上接头的片段；(e) 使用所述特定的限制性内切酶消化步骤（d）生成的片段，以产生粘性末端，随后环化，并用外切酶消化掉未环化的线性片段；(f) 使用复合引物扩增环化后的产物，并对产物进行筛选，得到目的片段。