[发明专利]一种奶牛宫颈粘液中抗精子抗体的检测方法

摘要

本发明分开了一种奶牛宫颈粘液中抗精子抗体的检测方法，包括1)取奶牛发情盛期的宫颈粘液备用；2)取公牛细管冻精、离心弃上清液，加入EBSS悬浮，将悬浮液铺在预先放有含10％胎牛血清的EBSS的试管底部，培养箱中孵育45min，取上层清液；3)将菠萝蛋白酶液加入室温下化冻宫颈粘液中离心；4)将步骤3)的上清液用EBSS液稀释后加入15μL步骤2)制备的上层清液混匀，覆以20μL石蜡油，孵育30min，凝集精子数计N，精子总数计Nz，以N/Nz≥10％判定为抗精子抗体阳性，＜10％为抗精子抗体阴性。该检测方法能够简易、快速检出奶牛群抗精子免疫不孕牛的方法。

主权项

一种奶牛宫颈粘液中抗精子抗体的检测方法，其特征在于，包括下列步骤：1)取奶牛发情盛期的宫颈粘液在‑20℃进行冷冻备用；2)取0.25ml活率≥0.40、密度≥108精子/ml的公牛细管冻精，38℃水浴解冻，700g离心8min后弃上清液，加入EBSS 1ml悬浮，将悬浮液铺在预先放有2ml含10％胎牛血清的EBSS的试管底部，倾斜45°在37℃、5％CO2培养箱中孵育45min，取上层清液；3)将500μl浓度为60μg/ml～160μg/ml的菠萝蛋白酶液加入500μl室温下化冻宫颈粘液中，37℃温育30min，2600g离心15min；4)将步骤3)的上清液用EBSS液作1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256共8个梯度稀释至15μL，再加入15μL步骤2)制备的上层清液混匀，覆以20μL石蜡油，5％CO2、37℃孵育30min，凝集精子数计N，精子总数计Nz，以N/Nz≥10％判定为抗精子抗体阳性，＜10％为抗精子抗体阴性。