[发明专利]一种重楼属植物细胞的Giemsa-C带染色方法

摘要

本发明属于细胞生物学技术领域，具体为一种重楼属植物细胞的Giemsa-C带染色方法，包括以下步骤：(1)材料的准备 取生长旺盛的重楼植物白色幼嫩根尖，置于冰水混合物中预处理，卡诺Ⅰ固定备用；(2)制片 将备好的根尖用盐酸解离，然后用醋酸压片，液氮揭片，无水乙醇脱水，置室内自然干燥；(3)变性 盐酸预变性，氢氧化钡变性；(4)复性 2×SSC复性；(5)染色 Giemsa染液染色；(6)光学显微镜镜检。本发明采用的重楼属植物Giemsa-C带染色方法制片污染低，带型分辨率高，带型稳定且简单易于操作。

主权项

一种重楼属植物细胞的Giemsa‑C带染色方法，其特征在于包括以下步骤：（1） 材料的准备  取生长旺盛的重楼植物白色幼嫩根尖，置于冰水混合物中预处理36—48h，卡诺Ⅰ（冰醋酸：酒精= 3：1）固定6—12h，转移至70%酒精中，然后在4℃冰箱中保存备用；（2） 制片  将备好的的重楼植物幼嫩根尖用盐酸解离，然后用蒸馏水洗净后用45%的醋酸压片，液氮揭片，无水乙醇脱水12h，置室内自然干燥2—3d；（3） 变性  将步骤2中的制片，放入在染缸中已预热好的60℃的0.2 molL‑1盐酸中处理155s，再用蒸馏水洗净；然后用氢氧化钡饱和溶液处理9—12min，用预热的蒸馏水置换洗至澄清；再用稀盐酸冲洗两次，除去残留的碳酸钡沉淀，再用蒸馏水洗净，洗净后将制片转另一干净染缸；（4） 复性  将步骤3中的制片，用2×SSC洗一次，然后加入2×SSC，放入已预热至30℃的水浴锅内，缓慢升温至60℃开始计时1—1.5h；（5） 染色  将步骤4中的制片，用pH为6.8的磷酸缓冲液冲洗两次，然后置于Giemsa染液中，在37—38℃的恒温箱内染色1.5—2.0h；（6） 镜检  在光学显微镜下观察，选取染色体分散良好，带纹清晰均匀的细胞拍照分析，得出结果，或用Eupara胶在盖片四周进行固封，制成半永久封片后观察，分析后得出结果。