[发明专利]肝癌组织中具备致瘤潜能的细胞团的分离方法

摘要

本发明公开了一种肝癌组织中具备致瘤潜能的细胞团的分离方法，本发明可以快速、简便和有效地从临床样本中分离到具备体外生长增殖、克隆形成和对抗肿瘤药物耐受能力的细胞团，并且其传代细胞在具备一定的稳定性，是分离和鉴定其中存在的高致瘤性的源头细胞的基础。在目前难以在原代组织中获得足够性状稳定的细胞研究肝癌干细胞及其生活的微环境的条下，研究这些细胞团的细胞组成及在其表现出的维持肿瘤细胞持续增长、耐药和致瘤性中发挥的作用，能够帮助研究者逐步缩小搜索范围，从而最终锁定导致肝癌形成和治疗后复发的元凶肝癌干细胞，结合研究其特定微环境来探索对临床治疗有借鉴价值的可行方案。

主权项

一种临床肝癌样本中样本能够维持肝癌特性的细胞团的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）收集临床标本，利用机械分离和透明质酸酶、IV型胶原酶和DNA酶联合消化制备组织团和细胞悬液；（2）将组织团和细胞悬液稀释先后用100um和40um孔径的滤网过滤，分别收集能通过40um滤网的细胞悬液和能通过100um滤网而不能通过40um滤网的细胞团；结合苔盼蓝染色方法细胞计数和统计细胞成活率，能通过40um孔径滤网的组分以单细胞为主要组分，能通过100um滤网而不能通过40um滤网组分为9‑29（23.8±6.9）个细胞组成的细胞团；（3）与能通过40um孔径滤网的以单细胞为主要组分的细胞悬液相比，能通过100um滤网而不能通过40um滤网的细胞团在体外原代培养中表现出明显显著的体外生长能力、耐药能力和克隆形成能力；（4）通过100um滤网而不能通过40um滤网的组织细胞团，从原代培养得到传代细胞与病理标本在抗人Hepatocyte、CK18、CK19和CD133等蛋白的表达上基本一致。