[发明专利]一种基于ITS基因的蔗扁蛾实时荧光PCR检测方法无效
| 申请号： | 201110084102.2 | 申请日： | 2011-04-06 |
| 公开（公告）号： | CN102146477A | 公开（公告）日： | 2011-08-10 |
| 发明（设计）人： | 廖力;徐淼锋;张卫东;黄国华 | 申请（专利权）人： | 中华人民共和国珠海出入境检验检疫局;湖南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 谭英强 |
| 地址： | 519015 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于ITS基因的蔗扁蛾实时荧光PCR检测方法，包括提取待检样品的DNA，制备成模板，使用上、下游引物和探针进行实时荧光PCR，根据Ct值，确定样品的种类。本方法快速、稳定可靠、灵敏度高，适用于蔗扁蛾不同虫态的检测。该方法为我国的鳞翅目谷蛾科扁蛾属在分子水平上的分类和近缘种的快速鉴定奠定了基础。研究结果可直接应用于进出境植物检疫中蔗扁蛾的检疫鉴定，这对保护我国农林业生产安全及维持生态平衡方面有极为重要的意义。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 its 基因 蔗扁蛾 实时 荧光 pcr 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种基于ITS基因的蔗扁蛾实时荧光PCR检测方法，包括以下步骤：取待检样品，采用SDS法提取基因组DNA，制备模板DNA，‑20℃保存备用；取上游扩增引物ITSTF402：5'‑CTCCAACCGCCGCCTCCTCCTCAGT‑3'（SEQ ID NO： 1）和下游引物ITSTR596：5'‑CCAAGTCGCATCCGTGACGGTTCG‑3'（SEQ ID NO： 2）及探针ITS194TM：5'‑FAM‑GAACCGCACCCGAGCGCGAGACG‑TAMRA‑3'、Premix Ex Taq和ddH2O，加入待检模板DNA，配成PCR反应体系，反应体系的总体积为25μl，各成分组成如下：12.5μl Premix Ex Taq(2×)、上、下游引物各0.75μl，浓度为10pmol/μl，5.5μl的ddH2O，0.5μl的探针，其浓度为10pmol/μl；5μl模板DNA；PCR反应条件为：95℃ 3min预变性，95℃ 10s，60℃ 30s，循环45次；读取Ct值判断检测结果。
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