[发明专利]利用锌指核酸酶敲除牛β-乳球蛋白基因的方法有效
| 申请号： | 201110086319.7 | 申请日： | 2011-04-07 |
| 公开（公告）号： | CN102212545A | 公开（公告）日： | 2011-10-12 |
| 发明（设计）人： | 于胜利;罗俊杰;丁方荣;李松;汤波;李宁 | 申请（专利权）人： | 北京济福霖生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/79 | 分类号： | C12N15/79;C12N5/071;C12N15/877;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王加岭;张庆敏 |
| 地址： | 100193 北京市海淀*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种利用锌指核酸酶敲除牛β-乳球蛋白基因的方法，其是根据牛β-乳球蛋白基因序列，设计ZFNs特异位点表达载体并转入牛的成纤维细胞中，获得β-乳球蛋白基因敲除的细胞。利用ZFNs介导的基因敲除，可以实现一次转染，得到双等位基因敲除的细胞克隆，这在常规基因打靶过程中是难以实现的，省去了药物筛选过程，有利于细胞单克隆的形成，避免了细胞需要对抗药物毒害的过程，对于后续的体细胞核移植效率和胚胎的发育质量的提高起到了关键作用，同时不含有抗性基因，大大简化了生物安全评价过程。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 核酸酶 球蛋白 基因 方法 | ||
【主权项】：
一种利用锌指核酸酶敲除牛β‑乳球蛋白基因的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)根据牛β‑乳球蛋白基因序列，设计ZFNs‑Set 1和ZFNs‑Set 2，其作用的DNA序列分别为：ZFNs‑Set 1：CCCAGGCCCTCATTGTCACCCAGACCATGAAGGGCCTGGA；ZFNs‑Set 2：AGGCCCTCATTGTCACCCAGACCATGAAGGGCCTGGATAT；2)构建ZFNs‑Set 1和ZFNs‑Set 2的真核表达载体；3)将上述真核表达载体分别转入牛的成纤维细胞中，PCR扩增，测序检测β‑乳球蛋白基因发生敲除的细胞。
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