[发明专利]利用宫内膜干细胞诱导分化功能心肌细胞的方法有效
| 申请号： | 201110092681.5 | 申请日： | 2011-04-13 |
| 公开（公告）号： | CN102199573A | 公开（公告）日： | 2011-09-28 |
| 发明（设计）人： | 项春生 | 申请（专利权）人： | 杭州易文赛生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775;C12N5/071 |
| 代理公司： | 杭州中成专利事务所有限公司 33212 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 311616 浙江省杭州市余*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用宫内膜干细胞诱导分化功能心肌细胞的方法，包括以下步骤：1)宫内膜干细胞的分离培养和扩增；2)体外诱导分化：将上述步骤1)所得的第4～6代生长状况良好的细胞以胰酶消化，当显微镜下见细胞变为单个圆形时即以含体积浓度为13～17％胎牛血清的DMEM培养基终止消化，离心，所得的细胞沉淀用PBS清洗；在上述PBS清洗后的细胞中加入诱导培养基置于4～6％CO2、94～96％饱和湿度的36～38℃培养箱中培养；培养时间为68～76小时，得功能心肌细胞。所得的功能心肌细胞能用于治疗心肌梗死。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 宫内 干细胞 诱导 分化 功能 心肌 细胞 方法 | ||
【主权项】：
利用宫内膜干细胞诱导分化功能心肌细胞的方法，其特征是包括以下步骤：1)、宫内膜干细胞的分离培养和扩增：将经血经含抗生素的杀菌液的杀菌处理后，离心，去上清液；然后加入Chang氏通用培养基置于4～6％CO2、94～96％饱和湿度的36～38℃培养箱中培养；培养5～7天后换液去除未贴壁细胞；一旦细胞生长至75～85％汇合度时，即采用胰酶消化传代；2)、体外诱导分化：将上述步骤1)所得的第4～6代生长状况良好的细胞以胰酶消化，当显微镜下见细胞变为单个圆形时即以含体积浓度为13～17％胎牛血清的DMEM培养基终止消化，离心，所得的细胞沉淀用PBS清洗；在上述PBS清洗后的细胞中加入诱导培养基置于4～6％CO2、94～96％饱和湿度的36～38℃培养箱中培养；每1×105个的细胞中加入0.8～1.2ml诱导培养基，所述诱导培养基为：在无血清DMEM培养基中含有1～10μM的5‑氮胞苷；培养时间为68～76小时，得功能心肌细胞。
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