[发明专利]肠三叶因子重组表达载体及肠三叶因子制备方法无效
| 申请号： | 201110095193.X | 申请日： | 2011-04-15 |
| 公开（公告）号： | CN102212547A | 公开（公告）日： | 2011-10-12 |
| 发明（设计）人： | 彭曦;金星;万千雪;吴丹 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N1/19;C12P21/02 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 400038 重*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种以pGAP为启动子，以毕赤酵母GS115为工程菌，在发酵罐中发酵表达肠三叶因子的工艺方法，首先构建重组毕赤酵母表达载体pGAPZɑA-ITF并转化到大肠杆菌Top10中扩增，提取大肠杆菌质粒线性化后转入酵母菌GS115中，根据载体上所带的zeocin抗性基因筛选高拷贝转化子并进行组成性表达，筛选高表达中试工程菌在培养基中发酵2天分泌表达ITF；通过纯化处理得到纯度95%以上的目的蛋白ITF，产量约为200mg/L，收率约50%；本发明生产成本低，发酵周期短，纯化方法简单，无需甲醇诱导，蛋白表达量高，为ITF的大规模工业化生产奠定了良好的基础。 | ||
| 搜索关键词： | 肠三叶 因子 重组 表达 载体 制备 方法 | ||
【主权项】：
肠三叶因子重组表达载体，其特征在于：所述肠三叶因子重组表达载体为如SEQ ID NO:1所示的DNA片段与pGAPZɑA载体连接而成。
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