[发明专利]肠三叶因子受体的分离方法

摘要

本发明属蛋白分离纯化领域，涉及肠三叶因子的受体的分离方法，包括：含有肠三叶因子的固相载体的制备、肠三叶因子及其受体复合物的制备及肠三叶因子受体的获得；本方法以重组表达的带有标签的肠三叶因子融合蛋白为配体，利用标签与层析柱的高亲和力使配体蛋白挂在层析柱上，利用配体和受体的亲和力捕获细胞提取物中的肠三叶因子受体蛋白，经逐级洗脱后收集洗脱液，浓缩、纯化，获得了较高纯度的肠三叶因子受体，该受体蛋白具有与肠三叶因子特异性结合的特点；该方法操作简便，重现性好，获得的肠三叶因子受体特异性强；保持了原有蛋白的生物活性以及抗原性，比现有的从组织中提取蛋白的方法省时省力，容易获取高产量目的蛋白，同时成本低廉。

主权项

肠三叶因子受体的亲和层析分离方法，其特征在于,具体包括以下步骤：A、含有肠三叶因子的固相载体的制备将带有生物标签的肠三叶因子融合蛋白为配体同亲和层析柱结合，得含有肠三叶因子的固相载体，所述生物标签为多聚组氨酸标签、谷胱甘肽硫转酶标签、麦芽糖结合蛋白标签、金黄色葡萄球菌蛋白A标签 、多聚精氨酸标签、多聚半胱氨酸标签、多聚苯丙氨酸标签、钙调蛋白结合肽标签 、纤维素结合域 标签、几丁质结合域标签、Flag‑标签、c‑Myc标签、Protein‑C标签、HA‑标签、生物素标签、DsbA标签, HAT标签、NusA标签、 Stag标签和SBP标签中的任一种；B、肠三叶因子及其受体复合物的制备将肠道上皮细胞的细胞膜组分同步骤A所得含有肠三叶因子的固相载体孵育结合，再用洗脱液洗脱，收集洗脱液，所述洗脱液中含有肠三叶因子‑肠三叶因子受体复合物；C、肠三叶因子受体的获得用聚丙烯酰胺凝胶电泳，高效液相色谱法或双向电泳法分离步骤B所得肠三叶因子及其受体复合物中的肠三叶因子和肠三叶因子受体，收集肠三叶因子受体。