[发明专利]一步法检测猪蓝耳病病毒核酸的方法无效
| 申请号： | 201110096675.7 | 申请日： | 2011-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN102181580A | 公开（公告）日： | 2011-09-14 |
| 发明（设计）人： | 刘东波;张柳莹;王睿 | 申请（专利权）人： | 湖南农安生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 长沙星耀专利事务所 43205 | 代理人： | 赵静华 |
| 地址： | 410000 湖南省长沙市隆*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 一步法检测猪蓝耳病病毒核酸的方法，包括样品采集和处理和检测，其样品采集是将动物血液样品滴加至FTA卡样品区内；所述检测包括：(1)设计针对通用型猪蓝耳病病毒的特异性引物和探针，并在探针上标记好FAM和TAMARA荧光基团；(2)配制和优化检测体系和反应条件，反应体系为25或50μl的三羟甲基氨基甲烷-HCl(pH7.8-9.0)，上下游引物各0.1-0.5μM，脱氧核苷酸混合物各100-400μM，探针0.1-0.5μM，莫洛尼小鼠白血病病毒反转录酶100-300U，热稳定性的DNA聚合酶1-5U，Mg2+-4-8M，均一化参比染料ROX300-500nM，每反应加入前述重悬在三羟甲基氨基甲烷-EDTAE缓冲液中样本1-15μl。本发明样品采集简便，使含有RNA样品的FTA卡可按普通邮件邮寄到任何一个中心试验室进行检测；降低污染风险，提高了检测灵敏度。 | ||
| 搜索关键词： | 一步法 检测 猪蓝耳病 病毒 核酸 方法 | ||
【主权项】：
一步法检测猪蓝耳病病毒核酸的方法，包括样品采集和处理和检测，其特征在于，所述样品采集将80‑100ul动物血液样品滴加至FTA卡样品区内；所述检测包括（1）设计针对通用型猪蓝耳病病毒的特异性引物和探针，并在探针上标记好FAM和TAMARA荧光基团:所述特异性引物是上游引物序列5’GGCAAATGATAACCACGCA 3’；下游引物序列5’ GCATATTTGACAAGGTTTACCACT 3’；所述探针序列是5’ CGGCGCCACGACGGTCAACG 3’， 在其5’端标记FAM荧光基团，在其3’端标记TAMARA淬灭基团； （2）配制和优化检测体系和反应条件，反应体系为25或50ul的三羟甲基氨基甲烷‑HCl(pH7.8‑9.0),上下游引物各0.1‑0.5uM,脱氧核苷酸混合物各100‑400uM, 探针0.1‑0.5uM,莫洛尼小鼠白血病病毒反转录酶100‑300U，热稳定性的DNA 聚合酶1‑5U,Mg2+‑4‑8M，均一化参比染料ROX300‑500nM，每反应加入前述重悬在三羟甲基氨基甲烷‑EDTAE缓冲液中样本1‑15ul。
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