[发明专利]一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法

摘要

本发明涉及分析化学、食品安全领域。一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，样品经TCA-乙腈体系沉淀蛋白、甲醇-0.1%甲酸水溶液体系提取，OasisHLB固相萃取柱净化后，采用EclipseXDB-C18分析柱，以乙腈—0.1﹪甲酸水溶液为流动相，梯度洗脱，电喷雾、正离子扫描模式分离与检测四种多肽类抗生素。四种多肽类抗生素检出限分别为：粘杆菌素25??g/kg，杆菌肽A100??g/kg，多粘菌素B??250??g/kg，维吉尼霉素M120??g/kg。回收率粘杆菌素74.9～88.1％，杆菌肽A76.2～89.0％，多粘菌素B76.6～81.2%，维吉尼霉素77.3～86.9％。变异系数（CV%）分别为：粘杆菌素5.7～15.1％，杆菌肽A7.2～15.7％，多粘菌素B6.0～8.0%，维吉尼霉素9.5～18.6％。检测限、回收率和精密度等技术指标满足国内外检测的有关要求。

主权项

一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：（1）样品提取：①称取已切碎的肌肉、肾脏或肝脏样品1.0～3.0 g于50mL具帽离心管中，加入适量无水硫酸钠，再加入5～15mL三氯乙酸溶液和1～3mL乙腈，9 500 rpm均质 2 min后，4℃下8 500 rpm离心10 min，上清液经快速定量滤纸转移至另一离心管，残渣中加入提取液超声提取10 min，振荡提取10 min，4℃下8 500 rpm离心10 min，上清液经快速定量滤纸转移至同一离心管（合并两次提取上清液），待脱脂；②乳样品：称取牛奶样品1～3.0 g于50mL具帽离心管中，加入适量无水硫酸钠和0.5～1.5 mL盐酸溶液，涡旋1 min后再加入20～30 mL提取液，超声提取10 min，振荡提取10 min，然后4℃下8 500 rpm离心10 min，上清液经快速定量滤纸过滤于另一离心管，待脱脂；（2）提取液脱脂向上步所得提取上清液离心管中加入正己烷5～15mL，涡旋2 min，4℃下6 000 rpm离心5 min，去掉上层（正己烷层）液，得下层液待固相萃取柱净化；（3）固相萃取柱净化将上步经脱脂的样品提取液转移至已活化好的HLB 固相萃取柱（甲醇、水各6mL活化），上样后先用5 mL水洗涤，弃去流出液，再用5 mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10 mL刻度试管中，整个固相萃取净化过程控制流速不超过2 mL/min，洗脱液在40℃水浴上用氮气吹干，残留物用标样溶解液溶解定容到1.0 mL，混匀，过0.22 m 微孔滤膜，供液相色谱 质谱/质谱仪测定；（4）液相色谱 质谱/质谱仪测定按照液相色谱－质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，质谱分离采用在正离子模式下进行母离子全扫描，再对其子离子进行全扫描，通过被测样品的质谱和相关信息，得到其定性和定量结果，定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物，定量测定时采用标准曲线法。