[发明专利]一种定量检测乙型肝炎病毒（HBV）的方法及其试剂盒

摘要

一种定量检测乙型肝炎病毒（HBV）的方法及其试剂盒，包括采用纳米磁珠法提取样品中乙肝病毒核酸作为标本模板，应用TaqMan荧光探针技术完成对该标本模板实时PCR检测过程，所述TaqMan荧光探针和竞争性内标分别标记下列其中一种不同颜色的荧光基团：FAM、Alexa546、JOE、HEX、TET；通过监测实时PCR反应体系中荧光信号的变化情况实现对样品中乙型肝炎病毒（HBV）的定量检测；试剂盒包括核酸提取试剂、核酸扩增试剂、对照品、标准品、内标。本发明从根本上解决现有荧光探针定量PCR技术存在的准确性差和灵敏性低的问题。适用于临床血液检测和诊断，监测和评价药物的疗效，也可用于中心血站血液筛查以及流行病学调查。

主权项

一种定量检测乙型肝炎病毒（HBV）的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：采用纳米磁珠法提取样品中乙肝病毒核酸作为模板，应用TaqMan 荧光探针技术完成对该标本模板实时PCR检测过程，并设计竞争性内标，通过检测内标是否正常来监测待测样本中是否具有PCR抑制物，避免PCR假阴性；其中：通过专用软件，根据分析比较乙型肝炎病毒目的基因序列，设计高保守性、特异性和高效性的TaqMan荧光探针和引物以及竞争性内标的探针和引物，所述TaqMan荧光探针和竞争性内标分别标记下列其中一种不同颜色的荧光基团：FAM、Alexa546、JOE、HEX、TET；所述实时PCR产物在60‑120个碱基对范围；在实时PCR反应液中，加入一种前述TaqMan荧光探针和引物，通过监测实时PCR反应体系中荧光信号的变化情况实现对样品中乙型肝炎病毒（HBV）的定量检测。