[发明专利]一种乌贼墨肽聚糖的制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种乌贼墨肽聚糖的制备方法和应用，其特征在于步骤为：将乌贼墨匀浆，丙酮脱脂，用Tris-Hcl缓冲液提取，离心后超滤，然后乙醇沉淀和sevag试剂除蛋白，旋转蒸发，冷冻干燥；接着分别采用DEAE-52离子交换层析柱和Sephadex G-75凝胶柱色谱进行分离纯化，收集洗脱液，冷冻干燥得到乌贼墨肽聚糖。本发明提取条件简便、操作易控制，制备成本较低，同时所制得的肽聚糖对人前列腺癌细胞DU-145、PC-3具有很强的细胞抑制增殖作用，并且随药物浓度及作用时间的增加，细胞抑制率也明显增加，与为抗前列腺癌提供了一条可行性研究途径，因此具有医学药用价值，易于推广应用。

主权项

一种乌贼墨肽聚糖的制备方法，其特征在于包括如下步骤：1)取新鲜乌贼墨匀浆，用丙酮脱脂；2)加入2～5倍体积的0.08～0.12M浓度的Tris‑Hcl缓冲液在3‑5℃下浸泡8～24h进行提取，离心后超滤，或者多次上述重复提取、离心后，然后合并、超滤；再乙醇沉淀和sevag试剂除蛋白，旋转蒸发，冷冻干燥；3)采用DEAE‑52离子交换层析柱分离，将步骤2)中的冷冻干燥物分别用Tris‑Hcl缓冲液，NaCL溶液0.1mol/L～1mol/L进行梯度洗脱，紫外280nm检测吸光度，同时采用苯酚‑硫酸法检测糖峰，收集峰值洗脱液，在490nm处检测糖峰，收集最佳峰的洗脱液，透析除盐，冷冻干燥；4)采用Sephadex G‑75凝胶柱色谱分离纯化，于280nm处检测，收集洗脱液，冷冻干燥；5)将步骤③所得样品进行纯度检测，通过高效液相和SDS‑PAGE凝胶电泳。