[发明专利]在昆虫细胞中表达重组人骨形态发生蛋白的方法无效
| 申请号： | 201110120294.8 | 申请日： | 2011-05-09 |
| 公开（公告）号： | CN102776198A | 公开（公告）日： | 2012-11-14 |
| 发明（设计）人： | 刁爱坡;王飞;许丽红;罗深恒 | 申请（专利权）人： | 扬州泰达生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/866;C12N7/01;C07K14/495;C07K1/22 |
| 代理公司： | 北京市金杜律师事务所 11256 | 代理人： | 杨宏军;尚继栋 |
| 地址： | 225117 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及在昆虫细胞中表达重组人骨形态发生蛋白的方法。所述方法包括以下步骤：将人骨形态发生蛋白(BMP)成熟肽基因片段克隆到改进的昆虫细胞-杆状病毒蛋白质表达载体上，共转染sf9昆虫细胞，制备带有BMP成熟肽基因片段的重组杆状病毒，然后侵染High5昆虫细胞，高效表达BMP成熟肽，再经Ni亲和柱纯化表达的BMP成熟肽。体外细胞碱性磷酸酶活性检测和小鼠体内肌袋包埋诱骨实验表明，表达的BMP2和BMP7均具有异位诱导骨生成的活性。利用昆虫细胞-杆状病毒蛋白质表达系统，每升培养昆虫细胞可获得纯化BMP2或BMP7成熟肽蛋白约40mg，比在CHO细胞中的成本降低至少10倍。 | ||
| 搜索关键词： | 昆虫 细胞 表达 重组 形态 发生 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
一种利用昆虫细胞‑杆状病毒蛋白质表达系统表达制备人骨形态发生蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)将人骨形态发生蛋白成熟肽基因片段克隆到昆虫细胞‑杆状病毒表达载体上，共转染第一昆虫细胞，培养该细胞，制备带有人骨形态发生蛋白成熟肽基因片段的重组杆状病毒；(2)用步骤(1)制备的重组杆状病毒感染第二昆虫细胞，培养该细胞，获得表达的人骨形态发生蛋白；(3)经亲和层析纯化步骤(2)获得的表达的人骨形态发生蛋白。
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