[发明专利]家蚕中部丝腺细胞合成分泌溶菌酶的方法

摘要

本发明公开了一种家蚕中部丝腺细胞合成分泌溶菌酶的方法。是先构建家蚕合成分泌溶菌酶的载体pBSer1hLYZ-A3EGFP质粒，再利用显微注射转基因家蚕技术将这种质粒与能够提供转座酶的辅助质粒一起导入到家蚕受精卵内，依靠piggyBac转座子的转座特性，使绿色荧光蛋白基因和溶菌酶基因导入到家蚕基因组内，并得到稳定遗传和表达，从而创制成一种能够在家蚕中部丝腺细胞特异性合成分泌溶菌酶的转基因家蚕，并进一步将这种转基因家蚕与丝胶蚕杂交，将杂交后代再与丝胶蚕回交3-5代，最后再自交使溶菌酶基因纯合，育成分泌溶菌酶的转基因家蚕新品种，为提高溶菌酶的生产效率、降低生产成本奠定基础。

主权项

一种家蚕中部丝腺细胞合成分泌溶菌酶的方法，其特征在于该方法的步骤如下：（1）采用分子生物学技术构建家蚕合成分泌溶菌酶的载体pBSer1hLYZ‑A3EGFP质粒；（2）采用显微注射转基因家蚕方法将pBSer1hLYZ‑A3EGFP质粒及能够提供转座酶trans的辅助质粒导入家蚕受精卵内，蚕卵孵化后饲养至成虫，自交续代为G1代，在G1代转基因家蚕的小蚕期，通过荧光体视显微镜观察选择表达EGFP标志基因的转基因家蚕，饲养至成虫与丝胶蚕杂交续代为G2代，G2代以后再与丝胶蚕回交3‑5代，以表达EGFP标志基因及丝胶蚕性状为每代的留种筛选标志；（3）与丝胶蚕多次回交后的蚕，再采用自交的方法使溶菌酶基因纯合，采用转基因昆虫荧光基因表达相对量无损伤测定方法选择溶菌酶基因纯合的转基因家蚕，育成中部丝腺细胞能够合成分泌溶菌酶、基因纯合的转基因家蚕新品种。