[发明专利]一种利用RNA恒温扩增的结核分枝杆菌核酸检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种利用RNA恒温扩增的结核分枝杆菌核酸检测试剂盒，试剂盒包含TB稀释液、TB反应液、TB检测液、SAT酶液、TB阳性对照、TB阴性对照；结核分枝杆菌经液化处理后通过加药培养和不加药培养，利用两种方法培养后的结核分枝杆菌之间存在的差异，利用免疫共沉淀或NaOH再处理两种培养后的结核分枝杆菌菌液，并对处理后的菌液进行SAT检测，根据检测结果来分析结核分枝杆菌的耐药性。本发明能简单有效的对结核分枝杆菌耐药性进行分析，简便，省时。

主权项

一种利用RNA恒温扩增的结核分枝杆菌核酸检测试剂盒，包括：(1)TB稀释液：为含RNase抑制剂的灭菌DEPC水溶液；(2)TB反应液：为含dNTPs和NTPs扩增所需组份，具体包含Tris 10～50mM，MgCl210～40mM，dNTP 0.5～5mM，NTP 1～10mM，PVP40 1～10％，KCl 5～40mM；(3)TB检测液：为恒温扩增时必需的TB引物和TB荧光探针溶解在TE溶液中配制而成，其中TB检测液中的引物和探针包含有以下一对或几对序列：TB T7：aatttaatac gactcactat agggagacac caacaagctg ataggccgcg g       aatttaatac gactcactat agggagagtc accccaccaa caagctgata ggc       aatttaatac gactcactat agggagagta ggccgtcacc ccaccaacaa gc       aatttaatac gactcactat agggagatca ccccaccaac aagctgatag gc       aatttaatac gactcactat agggagagta ggccgtcacc ccaccaacaa gctgatTBnT7：gagtggcgaa cgggtgagta ac       gcaagtcgaa cggaaaggtc tc       cgggtgagta acacgtgggt gatctgc       ctgggaaact gggtctaata c       gtggcgaacg ggtgagtaacTB Probe：cguccggaua ggaccacggg acg          ccacggauag gaccacggga ugcgugg          ccaggaugca ugucuugugg ccugg；(4)SAT酶液：为恒温扩增时必需的多酶组分体系，含T7 RNA聚合酶200～2000U/反应、M‑MLV反转录酶400～4000U/反应、2～10mM HEPES pH7.5、10～100mMN‑acetyl‑L‑cysteine、0.04～0.4mM zinc acetate、10～100mM trehalose、40～200mMTris‑HCl pH 8.0、40～200mM KCl、1～10mM EDTA、2～20％ v/v Triton X‑100、10～40％ v/v glycerol；(5)TB阳性对照；为含102～105CFU/ml结核分枝杆菌的菌液；(6)TB阴性对照：为不含有SEQ.ID.NO14核酸序列或不含有结核分枝杆菌的的溶液。