[发明专利]提高安普霉素菌种产抗能力的选育方法

摘要

本发明涉及一种提高安普霉素菌种产抗能力的选育方法。先选取自然系列菌种，对单孢子进行不同剂量的N＋离子注入并复合紫外线诱变，得到单菌落，经摇瓶发酵和遗传稳定性筛选得到二次出发菌种，对二次出发菌种进行亚硝基胍诱变，诱变后稀释，平皿涂布，培养，得到二次复合诱变单菌落，再次进行摇瓶发酵和遗传稳定性筛选得到三次出发菌种；对三次出发菌种进行摇瓶发酵配方的优化和筛选，采用正交试验或者均匀设计试验得到优化的培养基配方。本发明通过多次摇瓶发酵，多次初筛、复筛，从中挑选产抗能力水平较高且稳定的菌种，可以使诱变菌种的优良性状得以长久稳定并保持下来，解决了诱变菌种回复突变快、生产意义低的难题，同时采用改进的摇瓶发酵培养基配方，促使菌种产抗能力的提升。

主权项

提高安普霉素菌种产抗能力的选育方法，其特征是，该方法包括以下步骤：（1）选取性能稳定、一致的自然系列安普霉素菌种；（2）收集原始出发菌种孢子，打碎过滤得到单孢子，分别取0.1ml的单孢子在2×1014～6×1014N＋/cm2的范围内进行不同剂量的N＋离子注入；然后在15～20W紫外灯下照射30～90S，照射距离25～30cm，进行103～108倍的稀释，平皿涂布，33‑36℃培养5‑8天，得到首次复合诱变的单菌落；（3）将各剂量下首次复合诱变的单菌落挑选50～200个，进行摇瓶发酵；经过一次初筛，1～3次复筛，选出产抗能力提高5%以上的正突变菌种；对选出的正突变菌种进行2～3轮纯化，进行遗传稳定性筛选后得到二次出发菌种；（4）将二次出发菌种孢子打碎，过滤得到单孢子，然后进行亚硝基胍诱变，诱变剂为pH6.0、浓度为1000‑2000µg/ml亚硝基胍溶液，诱变后稀释103‑108倍，平皿涂布，在33‑36℃下培养5‑8天，得到二次复合诱变单菌落；（5）将二次复合诱变单菌落80～150个再次进行摇瓶发酵，经过一次初筛，1～4次复筛，选出产抗能力提高5%以上的正突变菌种；对选出的正突变菌种进行2～3轮纯化，进行遗传稳定性筛选后得到三次出发菌种； （6）对三次出发菌种进行摇瓶发酵配方的优化和筛选，采用正交试验或者均匀设计试验得到优化的培养基成分为：以重量百分比计，豆饼粉3.0‑5.0%，玉米淀粉2.0‑2.5%，花生饼粉1.0‑2.5%，葡萄糖2.0‑5.0%，氯化铵0.1‑0.5%，硫酸镁0.2‑0.8%，碳酸钙0.3‑1.0%，蛋白胨0.5‑2.0%，豆油0.5‑1.5%，淀粉酶为玉米淀粉量的0.1%，用水定容，消前pH7.2～7.6。