[发明专利]猪瘟抗体PPA-ELISA检测试剂盒及制备方法无效
| 申请号： | 201110142671.8 | 申请日： | 2011-05-30 |
| 公开（公告）号： | CN102807980A | 公开（公告）日： | 2012-12-05 |
| 发明（设计）人： | 沈志强;王金良;李娇;祖立闯 | 申请（专利权）人： | 山东省滨州畜牧兽医研究院 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/40;C12N15/70;C07K14/08;G01N33/569;G01N33/543 |
| 代理公司： | 北京神州华茂知识产权代理有限公司 11358 | 代理人： | 吴照幸 |
| 地址： | 256600 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种猪瘟抗体PPA-ELISA检测试剂盒及制备方法，该试剂盒的制备是采用RT-PCR扩增E2基因包含A、B、C、D共4个中和抗原区在内的550bp基因片段，将扩增的E2基因片段克隆到pMD18-T载体上，鉴定正确后，将目的片段进一步定向克隆到PGEX-6P-1原核表达载体，转化BL21表达菌，经IPTG诱导表达，获得了以包涵体形式表达的重组蛋白。采用亲和层析法分离纯化重组蛋白，免疫印迹检测纯化蛋白的抗原性和特异性。以该重组蛋白为包被抗原，以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白(SPA)为二抗，经过间接ELISA反应条件的优化，建立检测猪瘟病毒抗体的间接ELISA检测方法，并组装猪瘟抗体PPA-ELISA检测试剂盒。 | ||
| 搜索关键词： | 猪瘟 抗体 ppa elisa 检测 试剂盒 制备 方法 | ||
【主权项】：
一对用于扩增猪瘟病毒(CSFV)部分E2基因的特异性引物，其特征在于所述引物的序列为：CSFV上游引物：5’‑CGGAATTCGAAGATTACAGGTA TGCGATA‑3’CSFV下游引物：5’‑GGCCCTCGAGTTCCACACATGTCCAAT‑3’扩增目的片段大小为550bp。
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