[发明专利]一种不含基因组DNA的总RNA制备方法

摘要

本发明公开了一种不含基因组DNA的总RNA制备方法，本发明采用十二烷基硫酸钠作为裂解试剂，裂解细胞后使用醋酸钾和十二烷基硫酸钠反应生成十二烷基硫酸钾(PDS)沉淀，同时共沉淀蛋白质以及大部分基因组DNA，由于在酸性醋酸钾溶液、硫氰酸胍存在时核酸可与硅胶柱吸附，并且吸附的核酸可按分子量大小利用一定浓度醋酸钾解离的性质，利用硅胶柱分离总RNA和残留的基因组DNA。最后采用乙醇沉淀得到总RNA样品。其优点在于通过控制醋酸钾浓度，可使结合能力较差的小分子量的RNA和其他种类的RNA均进入穿过液，从而能得到较好的总RNA产率；同时使基因组DNA被硅胶膜吸附，以分离RNA和基因组DNA。

主权项

一种不含基因组DNA的总RNA制备方法，包括以下步骤：a)使用重悬液重悬需要提取的生物材料；b)加入与重悬液体积相同的十二烷基硫酸钠溶液，室温裂解3‑5分钟，或65度裂解0.5‑1分钟；c)加入酸性醋酸钾溶液，离心，去除出现的沉淀，取上清，醋酸钾和十二烷基硫酸钠溶液摩尔比值为1∶0.9‑1.1；d)将c)步骤所得上清加入酸性醋酸钾溶液，硫氰酸胍贮液，使醋酸钾终浓度为1mol/L，硫氰酸胍为1.5mol/L；离心5‑10分钟，取上清；e)将d)步骤所得的上清加入离心式硅胶柱，离心；收集穿过液，在穿过液中加入无水乙醇，混匀后，‑20℃静置10‑15分钟，离心10‑15分钟，弃上清。f)将所得RNA沉淀用洗涤液洗涤两次，空气中10‑15分钟晾干，然后加入超纯水溶解，即可。