[发明专利]同步检测SPFMV、SPVC、SPVG和SPV2的方法

摘要

本发明涉及一种同步检测SPFMV、SPVC、SPVG和SPV2的方法，属植物保护领域。通过分别设计合成SPFMV、SPVC、SPVG和SPV2特异性的正向引物和四种病毒的通用反向引物，CTAB法提取病组织总核酸，采用一步法四重RT-PCR，达到对这四种病毒的同步检测。所设计的引物特异性强，且四种病毒共用一条反向引物，显著减少了引物间的相互作用。将CTAB法应用到RNA病毒侵染植物组织的核酸提取中，既能保证RNA质量，又有效降低了检测成本。反转录与多重PCR一步完成，节约了检测时间。本发明具有快速、高效、特异性强、灵敏度高和成本低廉等优点，能一次实现四种甘薯病毒的同步检测，具有广阔的应用前景。

主权项

一种同步检测SPFMV、SPVC、SPVG和SPV2的方法，其步骤为：(1)引物设计合成：(a)设计合成检测SPFMV、SPVC、SPVG和SPV2的通用反向引物SPFCG2R：5’‑TCGGGACTGAARGAYACGAATTTAA‑3’，R＝A或G，Y＝C或T；(b)分别设计合成检测SPFMV、SPVC、SPVG和SPV2的正向引物SPFF、SPCF、SPGF和SP2F，引物序列如下：SPFF：5’‑GGATTAYGGTGTTGACGACACA‑3’，SPCF：5’‑GTGAGAAAYCTATGCGCTCTGTT‑3’，SPGF：5’‑GTATGAAGACTCTCTGACAAATTTTG‑3’，SP2F：5’‑CGTACATTGAAAAGAGAAACAGGATA‑3’，其中，Y＝C或T；(c)每对引物扩增片段大小及待测病毒为：(2)CTAB法提取感病植物组织的总核酸，作为RT‑PCR扩增模板；(3)一步法RT‑PCR扩增；(4)琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。