[发明专利]食物过敏原检测试剂盒及其制备方法

摘要

本发明公开了一种食物过敏原检测试剂盒及其制备方法，属于酶联免疫检测技术。本发明包括显色液A、显色液B，终止液，酶标抗IgE抗体，而在聚苯乙烯微孔板上包被有生物素化牛血清白蛋白-链霉亲和素；以及常见的多种过敏原如牛奶过敏原，鸡蛋过敏原，虾蟹过敏原等分别标记生物素。检测时，选择所需种类的生物素化过敏原与患者血清一道加入微孔板，生物素化过敏原与血清中的特异性抗体结合的同时，生物素和链霉亲和素结合，从而使过敏原-特异性抗体复合物固定于微孔板上，实现包被和反应的同步进行。通过一个检测试剂盒提供多种项目组合，满足患者个性化的检测需求。提高了检测试剂的通用性和利用率，避免无关项目的检测和试剂浪费。

主权项

一种食物过敏原检测试剂盒的制备方法，包括显色液A、显色液B，终止液，酶标抗IgE抗体，其特征在于：该试剂盒还包括包被了生物素化牛血清白蛋白‑链霉亲和素的聚苯乙烯微孔板，多种分别生物素化过敏原，其中：a.包被了生物素化牛血清白蛋白‑链霉亲和素的聚苯乙烯微孔板，是在聚苯乙烯微孔板上，每孔加入稀释液Ⅰ稀释的浓度为3‑5μg/ml的生物素化牛血清白蛋白包被缓冲液150µl，甩净后用稀释液Ⅰ洗板，甩净，拍干；每孔再加入稀释液Ⅱ稀释的浓度为3‑5μg/ml的链霉亲和素包被缓冲液 150µl，温浴，甩净，用稀释液Ⅱ洗板，甩净，拍干；每孔加入封闭溶液体积250µl，温浴过夜，甩净，拍干备用；b.多种生物素化过敏原，即将多种纯化的特异性抗体的过敏原分别用0.1mol/L，pH9.5的NaHCO3缓冲液透析，过夜并于280nm处测吸光度值，计算抗体总量；另将多种活化的生物素分别溶于二甲基甲酰胺，按照生物素与过敏原的摩尔比为15‑20:1的比例将二者混合反应1h，反应后的液体分别再用0.1mol/L 磷酸盐缓冲液4℃透析24小时，分装于试剂瓶中备用。