[发明专利]脱细胞干燥活性羊膜的制备方法

摘要

本发明公开了一种脱细胞干燥活性羊膜的制备方法，由如下步骤组成：(1)原料处理：取通过病原体检测后正常的足月剖腹产术后的人胎盘，用无菌生理盐水清洗，除去血液成分，将羊膜从胎盘绒毛膜上完整钝性分离，用细胞刮匙刮除羊膜基质面附着的基质成分；(2)反复冻融；(3)清洗；(4)冷冻干燥；(5)伽马射线消毒灭菌。本发明采用反复冻融和去污剂联合使用的方法去除羊膜细胞，克服单纯的冻融法脱细胞效果差的不足，能有效脱去羊膜上的细胞，很好地保持组织中胶原的结构和基底膜的完整性，而且保持了较好的力学性能，无细胞毒性。

主权项

一种脱细胞干燥活性羊膜的制备方法，其特征是由如下步骤组成：(1)原料处理：取通过病原体检测后正常的足月剖腹产术后的人胎盘，用无菌生理盐水清洗，除去血液成分，将羊膜从胎盘绒毛膜上完整钝性分离，用细胞刮匙刮除羊膜基质面附着的基质成分；(2)反复冻融：将步骤(1)处理后的羊膜于‑60℃～‑80℃冷冻2～6h，于37℃水浴融化10～40min，如此反复1～5次；(3)清洗：将步骤(2)处理后的羊膜浸入PBS液中，于4℃摇床清洗18～30h，取出浸入去污剂中，于20～40℃，在摇床20～200转/分的速度下振荡18～30h；取出，再浸入PBS液中，于2～10℃，在摇床20～200转/分的速度下振荡40～56h；每8h换一次PBS液；所述100ml去污剂溶液是用0.15ml～0.35ml的triton X‑100，0.15g～0.35g的脱氧胆酸钠溶液，余量为PBS配制而成；(4)冷冻干燥：将经步骤(3)清洗后的羊膜贴附于无菌的醋酸纤维素膜或聚偏氟乙烯膜上，切成统一尺寸的羊膜片，将羊膜片置于冷冻干燥机中，‑40～‑60℃冷冻干燥2～48h，除去水分，即获得脱细胞干燥活性羊膜；真空包装并封口；(5)伽马射线消毒灭菌。